【摘 要】
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目的构建SARS冠状病毒S蛋白部分序列1(S1)的原核重组表达质粒,并分析其在大肠杆菌中的表达状况.方法采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码S1蛋
【机 构】
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深圳市疾病预防控制中心,深圳市疾病预防控制中心,华中科技大学同济医学院,中山大学中山医学院
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目的构建SARS冠状病毒S蛋白部分序列1(S1)的原核重组表达质粒,并分析其在大肠杆菌中的表达状况.方法采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码S1蛋白的基因片段,并克隆至pMD18-T载体上;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序列分析;将阳性克隆的插入片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌JM109,PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析截短型S蛋白的表达.结果RT PCR扩增出S1蛋白的特异片段,其阳性克隆的序
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