【摘 要】
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BcpLH基因是大白菜包叶组织特异的新基因,含有双链RNA结合域。在含有His标记序列的原核表达载体pET28-a(+)上插入Bc-pLH基因的cDNA,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出了特异性
【机 构】
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中国科学院上海植物生理研究所,中国科学院上海植物生理研究所,中国科学院上海植物生理研究所,中国科学院上海植物生理研究所 上海 200032,上海 200032,上海 200032,上海 200032
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BcpLH基因是大白菜包叶组织特异的新基因,含有双链RNA结合域。在含有His标记序列的原核表达载体pET28-a(+)上插入Bc-pLH基因的cDNA,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出了特异性蛋白,并免疫大白兔制备出高效价的抗血清;同时,将BcpLH基因插入到含有超级助溶剂的pMAL-c2载体上,并在大肠杆菌DH5α中诱导表达,结果获得了可溶的蛋白。Western斑点印迹分析的结果证明了BcpLH的特异性。BcpLH活性蛋白及其抗血清的产生为研究BcpLH基因的RNA结合活性及其在植物发育上的调节机制创造了条件。
BcpLH gene is a new gene specific for cabbage and leaf tissue, containing double-stranded RNA binding domain. The cDNA of Bc-pLH gene was inserted into the prokaryotic expression vector pET28-a (+) containing the His-tagged sequence, and the specific protein was induced in E. coli BL21 (DE3) At the same time, the BcpLH gene was inserted into the pMAL-c2 vector containing the super cosolvent and induced to express in E. coli DH5α. As a result, soluble protein was obtained. The results of Western blot analysis demonstrated the specificity of BcpLH. The production of BcpLH active protein and its antiserum provides the conditions for studying the RNA-binding activity of BcpLH gene and its regulatory mechanism in plant development.
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