【摘 要】
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分别以短期培养的5头牛卵丘细胞(1～5 BCC)为细胞核供体, 共用1188枚体外成熟的去核卵母细胞构建了931枚重构胚(78.4%). 体外培养后, 763枚(82%)发育至2-细胞期, 627枚(67.3%)
【机 构】
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中国农业大学农业生物技术国家重点实验,中国农业大学动物科技学院
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分别以短期培养的5头牛卵丘细胞(1～5 BCC)为细胞核供体, 共用1188枚体外成熟的去核卵母细胞构建了931枚重构胚(78.4%). 体外培养后, 763枚(82%)发育至2-细胞期, 627枚(67.3%)发育至8-细胞期, 最后获得囊胚275枚(29.5%). 囊胚的平均细胞数为124±24.5 (n = 20). 分析不同个体来源的卵丘细胞, 同一个体卵丘细胞饥饿与否以及饥饿时间的长短、融合后核/质相容时间(融合到激活的时间长短)等因素对核移植效率的影响发现, 5个个体的体细胞核移植囊胚率(14.1%, 45.2%, 27.3%, 34.3% vs 1.5%)有显著差异(P < 0.05). 同一供体细胞饥饿与否(47.1% vs 44.4%)、饥饿11～12 d (52.5%)和18～19 d (41.6%)均不影响核移植囊胚率(P≥0.05). 核/质相容2～3 h的囊胚率(20.3%)显著低于3～6 h组(31.0%, P < 0.05). 3～6 h范围内, 囊胚率无差异(P≥0.05). 其中63枚冷冻的核移植囊胚解冻后移植给31头受体牛, 妊娠4例, 最后顺利获得2头克隆牛犊. 结果表明, 牛卵丘细胞饥饿不是核移植成功的关键因素, 核质相容程度和供体细胞的个体差异对核移植效率有一定影响. 卵丘细胞能够获得全程发育的克隆牛犊.
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