Midkine启动子调控的HSV-TK基因重组腺病毒的构建

• 作 者: 陆春明 王荣 顾红光 陆建华 杨俊涛
• 机 构: 重庆第三军医大学第三附院大坪医院
• 出 处: 山东医药
• 发表日期: 2006年5期
• 关键词: 胸苷激酶 基因 基因载体 重组 腺病毒 midkine gene genetic vector recombinant adenovirus

目的构建以人midkine（MK）启动子调控的TK基因的重组复制缺陷型腺病毒。方法以Adeno-XTM表达试剂盒为基础，应用分子克隆技术，将穿梭质粒pShuttle的CMV启动子替换为MK启动子，并将由pHSV-106获取HSV-TK基因的编码序列亚克隆至其下游，酶切鉴定阳性重组穿梭质粒pShuttle-MK-TK。通过I-CeuⅠ和PI-SceⅠ两个稀有酶切位点．将目的基因与腺病毒质粒DNA（pAdeno-X）进行体外连接，获得含目的基因的重组腺病毒质粒DNA，后者经限制性内切酶PacⅠ切割后，两端露出