【摘 要】
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目的建立结核分枝杆菌的分子信标荧光定量PCR检测方法,探讨该方法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法针对结核分枝杆菌Ag85BDNA特异保守序列设计引物和分子信标探针,并构
【基金项目】
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江苏省卫生厅预防医学科研课题项目(Y2006028)资助
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目的建立结核分枝杆菌的分子信标荧光定量PCR检测方法,探讨该方法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法针对结核分枝杆菌Ag85BDNA特异保守序列设计引物和分子信标探针,并构建标准品。采用分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法检测158例肺结核患者痰液标本,比较3种方法的检出率。结果所建立方法最低检测限度为2个基因拷贝/反应,在2×102～2×108基因拷贝/mL范围内,Ct值同DNA量的对数呈线性关系。该方法检测5株非分枝杆菌和6株非结核分枝杆菌结果均为阴性,检测结核分枝杆菌H37Rv出现75 bp特异条带。分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法阳性检出率分别为60.13%、16.46%、31.01%,荧光定量PCR法检出率明显高于抗酸染色法和集菌培养法。结论分子信标荧光定量PCR法具有较高的灵敏度和特异度,对结核病的诊断有一定的临床意义。
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