【摘 要】
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采用基因重组大肠杆菌表达(R)-羰基还原酶,通过优化诱导温度、碳源类型和补料速度,初步确定最佳产酶条件:诱导温度为28℃,碳源类型为葡萄糖,最佳补料速度为20 ml/h,产酶活力
【机 构】
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江苏八巨药业有限公司,江苏盐城,224555浙江车头制药股份有限公司,浙江台州,317321;浙江工业大学化工学院,浙江杭州,310014;
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采用基因重组大肠杆菌表达(R)-羰基还原酶,通过优化诱导温度、碳源类型和补料速度,初步确定最佳产酶条件:诱导温度为28℃,碳源类型为葡萄糖,最佳补料速度为20 ml/h,产酶活力提高至63.1 U/g.利用葡萄糖脱氢酶耦合(R)-羰基还原酶催化制备奈必洛尔关键中间体(R)-2-氯-1-[(R)-6-氟苯并二氢吡喃-2-基]-1-乙醇,确定葡萄糖脱氢酶和羰基还原酶的最佳投酶量.当底物2-氯-1-[(R)-6-氟苯并二氢吡喃-2-基]-1-乙酮投料量为5 g时,葡萄糖脱氢酶和(R)-羰基还原酶的最佳投酶量为1 000U和120U,所制备目标化合物纯度98.3％,收率91％,手性HPLC纯度为99.6％,手性GC纯度为98.5％.
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