大肠杆菌LTB与霍乱弧菌CTB基因的克隆和表达及鉴定

• 作 者: 夏肖萍 严杰 钊守凤 毛亚飞 李淑萍
• 机 构: 浙江大学医学院病原生物学教研室
• 出 处: 浙江大学学报(医学版)
• 发表日期: 2003年1期
• 关键词: 大肠杆菌 LTB基因 霍乱弧菌 CTB基因 分子克隆 LTB融合蛋白 CTB融合蛋白 免疫学 Escherichia coli CTB gene Vibri

目的:克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及霍乱弧菌肠毒素B亚单位(CTB)基因,构建其表达载体.方法:采用高保真PCR分别从E.coli 44815株与V.cholerae东74株基因组DNA中扩增LTB与CTB基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.分别构建pET32a的LTB及CTB表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE及GM1-ELISA鉴定表达产物.结果:所克隆的LTB和CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为99.12%～99.7