【摘 要】
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豚鼠气单胞菌CB101(Aeromonas caviae)能产生多种分子量不同的几丁质酶.根据已知几丁质酶基因DNA保守序列,利用人工合成的PCR引物和CB101总DNA,扩增出一个约2.6kb的片段并克
【机 构】
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厦门大学生命科学学院,国家海洋局第三海洋研究所海洋生物工程重点实验室
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豚鼠气单胞菌CB101(Aeromonas caviae)能产生多种分子量不同的几丁质酶.根据已知几丁质酶基因DNA保守序列,利用人工合成的PCR引物和CB101总DNA,扩增出一个约2.6kb的片段并克隆到pBluescriptII KS载体上.序列分析表明,这是目前已克隆的最大的微生物几丁质酶基因之一,编码865个氨基酸,蛋白质分子质量为91.5ku,包括N-末端信号肽序列,PKD(Poly-cystic kidney disease,多囊肾)结构域,催化区,C-末端REJ(Receptor for Egg Jelly,卵胶膜受体)区域和两个几丁结合区.该酶同时具有几丁质外切和内切功能,降解胶体几丁质成几丁二糖、三糖和N-乙酰葡萄糖胺.去除其C末端302个氨基酸后,位于N末端的PKD结构域和催化区同样具有较强活性,但其胶体几丁质降解产物为几丁二、三、四糖.进一步的实验证实全酶的最低分子量底物为几丁三糖,而去除C端的酶片段的最低分子量底物为几丁四糖.
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