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目的
探讨人工诱导RNA干扰技术在EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein-1,LMP-1)功能研究中的应用价值,观察LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞生长的影响.
方法人工合成4条双链不同序列的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),通过脂质体转染导入表达EB病毒基因的鼻咽癌C611细胞后,用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测LMP-1 mRNA水平,筛选出能有效抑制LMP-1表达的siRNA序列.采用噻唑蓝法和流式细胞仪观察LMP-1表达抑制后,鼻咽癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的变化.
结果导入有效siRNA后,C611细胞中LMP-1 mRNA水平下降90%以上,重复转染可使有效干扰时间延长至96 h.LMP-1基因抑制后,EB病毒阳性的C611细胞增殖速度最多可下降至32.9%;细胞周期在G0-G1期受阻.在同样处理下,EB病毒阴性的HNE-2细胞的生长则未受到影响.
结论全新的人工诱导RNA干扰技术能够有效抑制LMP-1基因的表达,降低鼻咽癌细胞的增殖能力,为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新的思路.