【摘 要】
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目的探讨P53与Ras及常见Ras突变协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的影响。方法 P53-/-的结肠癌细胞(HCT116 P53-/-)中分别单转染Ras野生型、Ras V12、Ras N17质粒,另外3组
【机 构】
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山东省肿瘤医院外科四病区,首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所,
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目的探讨P53与Ras及常见Ras突变协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的影响。方法 P53-/-的结肠癌细胞(HCT116 P53-/-)中分别单转染Ras野生型、Ras V12、Ras N17质粒,另外3组细胞分别转染以上质粒后感染P53腺病毒。用奥沙利铂处理12 h后分别用钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)染色、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、免疫印迹(WB)检测各组凋亡水平。结果 Calcein-AM/PI染色显示,Ras V12转染组凋亡率[(16.8±1.7)%]显著高于Ras[(8.3±1.5)%,P<0.01]和Ras N17转染组[(4.4±1.6)%,P<0.01],Ras N17转染组凋亡率最低(P=0.016);P53腺病毒处理3组凋亡率均显著增高,仍以Ras V12转染组凋亡率[(25.9±2.2)%]为最高,Ras N17转染组最低[(7.6±1.2)%]。Real-time PCR和WB显示,P53存在与不存在条件下,Ras V12转染组Bax m RNA和蛋白表达均显著高于Ras和Ras N17转染组;Bcl-2水平则与Bax水平相反(P均<0.05)。结论 Ras突变体Ras V12过表达能够引起奥沙利铂作用下细胞凋亡的增加,而突变体RAS N17能够降低细胞凋亡;P53与Ras有协同作用,能够提高Ras的促细胞凋亡作用,提高细胞对奥沙利铂化疗药的敏感性。
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