富氢盐水减轻脓毒症小鼠肺损伤时自噬与NLRP3炎症小体的关系

• 作 者: 张杨 陈红光 谢克亮 于泳浩
• 机 构: 天津医科大学总医院麻醉科 天津市麻醉学研究所 300052,天津医科大学总医院麻醉科 天津市麻醉学研究所 300052,天津医科大学总医院麻醉科 天津市麻醉学研究所 300052,天津医科大学总医院麻
• 出 处: 中华麻醉学杂志
• 发表日期: 2019年39期
• 关键词: 氢 脓毒症 急性肺损伤 NLR家族 热蛋白结合域包含蛋白3 自噬

目的

评价富氢盐水减轻脓毒症小鼠肺损伤时自噬与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的关系。

方法

清洁级健康雄性C57BL小鼠36只，体重20～25 g，6周龄，采用随机数字表法分为6组(n＝6)：假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、脓毒症＋富氢盐水组(Sep＋H₂组)、脓毒症＋富氢盐水＋雷帕霉素组(Sep＋H₂＋Rap组)、脓毒症＋富氢盐水＋3-甲基腺嘌呤组(Sep＋H₂＋3-MA组)和脓毒症＋富氢盐水＋MCC950组(Sep＋H₂＋ M组)。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备小鼠脓毒症模型。Sep＋H₂组、Sep＋H₂＋Rap组、Sep＋H₂＋3-MA组和Sep＋H₂＋ M组于CLP术后1和6 h时腹腔注射富氢盐水5 ml/kg。于CLP术后1 h时，Sep＋H₂＋Rap组腹腔注射自噬激动剂雷帕霉素10 mg/kg，Sep＋H₂＋3-MA组腹腔注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤15 mg/kg，Sep＋H₂＋ M组腹腔注射NLRP3炎症小体抑制剂MCC950 50 mg/kg。造模后24 h时，收集支气管肺泡灌洗液(BALF)，测定蛋白浓度；然后断颈法处死小鼠，取肺组织，光镜下观察病理学结果，并行病理学损伤评分，测定湿重/干重比值(W/D比值)，采用分光光度计法测定MPO活性，采用ELISA法检测IL-1β、IL-18和TNF-α含量，采用Western blot法测定pro-caspase-1 P10、NLRP3和凋亡相关点状蛋白(ASC)的表达。

结果

与Sham组比较，Sep组和Sep＋H₂组BALF蛋白浓度、肺组织病理学损伤评分、W/D比值、MPO活性、IL-β、IL-18、TNF-α含量和pro-caspase-1 P10、NLRP3、ASC表达水平升高(P<0.05)。与Sep组比较，Sep＋H₂组、Sep＋H₂＋Rap组和Sep＋H₂＋3-MA组BALF蛋白浓度、肺组织病理学损伤评分、W/D比值、MPO活性、IL-β、IL-18、TNF-α含量和pro-caspase-1 P10、NLRP3、ASC表达水平降低(P<0.05)。与Sep＋H₂组比较，Sep＋H₂＋Rap组和Sep＋H₂＋ M组BALF蛋白浓度、肺组织病理学损伤评分、W/D比值、MPO活性、IL-β、IL-18、TNF-α含量和pro-caspase-1 P10、NLRP3、ASC表达水平降低(P<0.05)，Sep＋H₂＋3-MA组BALF蛋白浓度、肺组织病理学损伤评分、W/D比值、MPO活性、IL-β、IL-18、TNF-α含量和pro-caspase-1 P10、NLRP3、ASC表达水平升高(P<0.05)。

结论

富氢盐水减轻脓毒症小鼠肺损伤的机制与抑制自噬介导的NLRP3炎症小体激活有关。