GFP重组腺相关病毒报告病毒的构建及其在NIH 3T3细胞中的表达

• 作 者: 邢俊平 杨宇 王全颖 杨广笑 邱曙东
• 机 构: 西安交通大学第一医院泌尿外科,吉林大学第一医院神经内科,西安华广生物工程公司分子生物学实验室,西安交通大学生殖医学研究中心
• 出 处: 西安交通大学学报：医学版
• 发表日期: 2005年4期
• 关键词: 绿色荧光蛋白 报告基因 表达 GFP reporter gene expression

目的构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组腺相关病毒载体和报告病毒,并观察其在真核细胞的表达.方法采用DNA重组技术将GFP基因片段亚克隆到pssHGCMV载体的EcoRⅠ和BamHⅠ位点,构建表达GFP重组腺相关病毒载体pssHGCMV-GFP.以此载体转染143细胞进行GFP重组腺相关病毒包装,产生重组报告病毒颗粒并作纯化.用地高辛标记的CMV polyA片段作为探针,采用斑点杂交方法检测重组病毒的物理滴度.采用氯化钙法体外转染培养的NIH 3T3细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察其在细胞