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目的
构建具有高灵敏度和高选择性的石英晶体微天平(QCM)免疫传感器,实现对己烯雌酚(DES)的快速检测。
方法利用葡聚糖还原法制备粒径为40 nm的修饰有氨基的纳米金颗粒,将其与DES抗体偶联,制备纳米金-抗体偶联物。将晶片浸泡于5 mmol/L的巯基十一烷酸(MUA)溶液中16 h,用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化后,取20 μl 2.2 mg/ml的DES完全抗原(DES-HS-BSA),滴加于晶片表面,实现DES-HS-BSA在晶片表面的固定。另取50 μl 1 mol/L的乙醇胺溶液(pH 8.5)进行封闭,制备能够特异性识别DES的敏感膜。将QCM免疫传感器作为检测平台对反应条件进行优化,在优化条件的基础上,将10 μl 28 μg/ml的纳米金-抗体偶联物和10 μl 0.032~2.5 μg/ml的DES溶液混合均匀后滴加于制备有敏感膜的晶片表面,用QCM免疫传感器进行检测并绘制标准曲线。根据标准曲线方程计算最低检出限。对相同浓度的DES及其结构功能类似物进行检测,评估QCM免疫传感器的特异性。
结果DES-HS-BSA的最佳固定浓度为2.2 mg/ml;7 μg/ml的DES抗体和15 nmol/L的纳米金颗粒为两者的最佳偶联浓度;纳米金-抗体偶联物的最佳浓度为14 μg/ml。在0.16~500 ng/ml范围内,DES浓度的对数值与频移呈线性关系,标准曲线方程为Δf=-24.17 lgCDES+69.72,R2=0.998。该方法的检出限为0.13 ng/ml。DES结构功能类似物不会对DES的检测造成明显的干扰,该传感器具有很好的特异性。
结论纳米金信号放大QCM免疫传感器能够快速灵敏的对DES进行检测。