【摘 要】
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目的 建立错配PCR-限制性片段长度多态性(mPCR-RFLP)检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区A1896变异的方法,与直接测序法比较,评估其应用价值.方法 利用错配PCR的原理扩增HBV前C区长19
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目的 建立错配PCR-限制性片段长度多态性(mPCR-RFLP)检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区A1896变异的方法,与直接测序法比较,评估其应用价值.方法 利用错配PCR的原理扩增HBV前C区长194 bp的基因片段,扩增产物经限制性内切酶Bsu36I酶切,琼脂糖凝胶电泳,根据酶切图谱多态性,建立检测HBV前C A1896变异的方法,对134份乙肝患者血清进行分析,酶切同时测序.2份标本用克隆测序以验证酶切鉴定变异株、野株混合感染的准确性.结果 134份血清中117(87.31%)份能用酶切、109(81.34%)份能用测序成功分析HBV前C A1896状况.酶切与测序均成功的10l份血清中,54份为前C区A1896变异株,47份为前C区G1896野株,酶切与测序的结果完全一致.1份酶切鉴定为单纯前C区A1896变异株的5个克隆子均为前C区A1896变异株;1份酶切鉴定为混合感染标本的5个克隆子中,1个为前C区A1896变异株,另外4个为前C区G1896野株.酶切分析结果与克隆测序结果完全相符.结论 与测序法相比,本方法简便、特异性强,能鉴定混合感染,适合大样本分析,可用于临床及流行病学调查.
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