嗜酸氧化亚铁硫杆菌半肤氨酸合成酶的表达、纯化及其性质鉴定

• 作 者: 郑春丽 李艳君 钱林 柳建设
• 机 构: 东华大学环境科学与工程学院,上海,201620内蒙古科技大学数理与生物工程学院,包头,014010;内蒙古科技大学数理与生物工程学院,包头,014010;东华大学环境科学与工程学院,上海,201620
• 出 处: 生物技术通报
• 发表日期: 2011年3期
• 关键词: 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 半脱氨酸合成酶(cysM) 克隆 表达 纯化

半脱氨酸合成酶是半脱氨酸合成反应的关键限速酶,催化了半胶氨酸合成的最后一个步骤.以A.ferrooxidans ATCC 23270基因组为模板,通过PCR扩增得到编码半脱氨酸合成酶(cysM)的基因,与原核表达载体PLM 1构建重组体,转入大肠杆菌DH5α中,测序正确后,加IPTG诱导表达,用一步亲和层析法纯化出了浓度和纯度都较高的半胱氨酸合成酶.由蛋白颜色和紫外分析,确定是以PLP辅基作为活性中心.表达产物进行SDS-PAGE分析,证实分子童为32 kD.