【摘 要】
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目的 观察二氢杨梅素(DHM)和吡柔比星(THP)单用及联合培养对人肝母细胞瘤(HB)细胞株HuH-6活性和人心肌细胞株AC16毒性反应的影响,探讨DHM与THP联合化疗抗HB的作用机制.方法 取HuH-6和AC16细胞进行培养,分别加入梯度浓度(0、100、150、200、250、300μmol/L)DHM进行干预,采用CCK-8法检测细胞活性,筛选HuH-6细胞活性最低而AC16细胞活性无明显变化的作用浓度作为DHM的最佳作用浓度.以最佳作用浓度的DHM分别与梯度浓度(4、6、8、10μmol/L)T
【机 构】
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广东医科大学附属医院小儿外科,广东湛江524000;广东医科大学附属医院肝胆外科
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目的 观察二氢杨梅素(DHM)和吡柔比星(THP)单用及联合培养对人肝母细胞瘤(HB)细胞株HuH-6活性和人心肌细胞株AC16毒性反应的影响,探讨DHM与THP联合化疗抗HB的作用机制.方法 取HuH-6和AC16细胞进行培养,分别加入梯度浓度(0、100、150、200、250、300μmol/L)DHM进行干预,采用CCK-8法检测细胞活性,筛选HuH-6细胞活性最低而AC16细胞活性无明显变化的作用浓度作为DHM的最佳作用浓度.以最佳作用浓度的DHM分别与梯度浓度(4、6、8、10μmol/L)THP联合作用来处理HuH-6和AC16细胞,采用CCK-8法检测HuH-6细胞活性,采用LDH释放试验检测AC16细胞毒性,筛选在有效抑制HuH-6细胞活性的同时,对AC16细胞毒性作用最弱的THP最佳作用浓度用于后续实验.将AC16细胞分为4组,Ctrl组正常培养;DHM组加入DHM;THP组加入THP;DHM+THP组同时加入DHM和THP.采用探针法检测各组细胞内ROS生成水平,BrdU掺入法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞早期和晚期凋亡情况,Western blotting法检测细胞p-Akt/Akt、细胞增殖相关蛋白PCNA以及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9水平.结果 当250μmol/L的DHM与6μmol/L的THP联合作用时,在有效抑制HuH-6细胞活性的同时对AC16细胞的毒性作用最弱,故选择该浓度作为DHM与THP联合作用的最佳作用浓度.与Ctrl组比较,DHM组、THP组、DHM+THP组ROS水平均升高(P均<0.05),与THP组比较,DHM+THP组ROS水平降低(P<0.05).与Ctrl组相比,DHM组、THP组、DHM+THP组BrdU阳性率均降低(P均<0.05);与DHM组比较,THP组、DHM+THP组BrdU阳性率降低(P均0.05).与Ctrl组相比,DHM、THP、DHM+THP组早、晚期凋亡率均增加(P均<0.05);与DHM组相比,THP组早期凋亡率降低而晚期凋亡率增加(P均<0.05),DHM+THP组早、晚期凋亡率均增加(P均<0.05);与THP组相比,DHM+THP组早期凋亡率升高而晚期凋亡率降低(P均<0.05).与Ctrl组相比,DHM组和DHM+THP组p-Akt/Akt降低,DHM组、THP组和DHM+THP组PCNA、Bcl-2/Bax水平降低,DHM组、THP组和DHM+THP组cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9水平升高(P均<0.05);与DHM组和THP组相比,DHM+THP组p-Akt/Akt、PCNA、Bcl-2/Bax水平降低,cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9水平升高(P均<0.05).结论 DHM与THP联合作用时抗HB肿瘤细胞效果增强且心肌细胞毒性不叠加;DHM可能通过阻断Akt活化从而抑制PI3K/Akt信号通路,增强THP对HuH-6细胞的增殖抑制作用及凋亡促进作用,DHM与THP联合化疗对HB有一定的治疗潜力.
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