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目的
构建日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32，探讨重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达。
方法以重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所保存的质粒pGEX-Sj14-3-3和pET28α-Sj32为模板，通过PCR扩增Sj14-3-3和Sj32抗原编码基因，然后采用基因拼接法（gene SOEing）剪接Sj14-3-3和Sj32基因，得到Sj14-3-3-Sj32融合基因，定向克隆入穿梭载体pGEX-1λT，构建重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32，并采用双酶切法进行验证。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达后，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Western blot）法对表达产物进行分析鉴定。
结果基因拼接法得到约1 750 bp的Sj14-3-3-Sj32融合基因；双酶切证实Sj14-3-3-Sj32融合基因成功插入pGEX-1λT载体中；SDS-PAGE分析显示，表达产物为相对分子质量约为73 × 103的重组蛋白；Western blot显示，重组蛋白可被日本血吸虫感染的兔血清识别。
结论成功构建日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32，该重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中得到了高效融合表达，且表达的融合蛋白具有特异的抗原性。