成体人牙囊细胞的分离培养及生物学特性研究

• 作 者: 张超 程祥荣
• 机 构: 首都医科大学口腔医学院修复科,100050,430079武汉大学口腔医学院口腔基础医学省部共建国家重点实验室培育基地和口腔生物医学教育部重点实验室
• 出 处: 中华口腔医学杂志
• 发表日期: 2013年48期
• 关键词: Dental sac Stem cells Cell culture techniques Tissue engineering

目的 从成体人牙囊组织中分离培养牙周组织的前体细胞及牙囊细胞并进行生物学特性评价,分析牙囊细胞作为牙周组织工程种子细胞的可能性.方法 用胶原酶消化联合组织块培养的方法从17～22岁拔牙患者完全埋伏阻生的第三磨牙牙囊中分离培养牙囊细胞,用有限稀释法检测牙囊细胞的克隆形成能力,免疫组化检测牙囊细胞中基质细胞抗原1(Stro-1)、缺刻蛋白1(Notch-1)、巢蛋白(nestin)的表达.将牙囊细胞分别经矿化、脂肪化、软骨化诱导培养后检测其多向分化能力.甲基噻唑基四唑(methyl thiazoloyl tetrazolium,MTT)法比较牙囊细胞和牙周膜细胞(periodontal ligament cell,PDLC)的增殖能力.反转录PCR(reverse transcriptase-PCR,RT-PCR)检测比较牙囊细胞和PDLC中生腱蛋白N(tenascin-N)和细胞外基质底物反应蛋白1(F-spondin)基因的表达.结果 牙囊细胞大多数为梭形成纤维样细胞,具有克隆形成能力,克隆形成率为3.70％.牙囊细胞中部分细胞Stro-1表达阳性、几乎所有细胞Notch-1、巢蛋白均表达阳性.牙囊细胞经矿化、脂肪化、软骨化诱导培养21 d后,可分别形成矿化结节、细胞内脂滴及Ⅱ型胶原.MTT结果显示,牙囊细胞和PDLC在孔板中均生长良好,增殖迅速.培养第3天和第5天,牙囊细胞增殖能力[A值分别为(0.20±0.01)、(0.51±0.09)]均大于PDLC[A值分别为(0.16±0.03)、(0.47±0.07)],但差异无统计学意义(P＞0.05)；第7天时,牙囊细胞增殖能力[A值为(1.03±0.11)]显著高于PDLC[A值为(0.93±0.09)],差异有统计意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示:tenascin-N在牙囊细胞中几乎无表达,而在PDLC中有较强表达；F-spondin在牙囊细胞中强阳性表达,在PDLC中无表达.结论 胶原酶消化联合组织块培养的方法为培养牙囊细胞的适宜方法；牙囊细胞具有良好的细胞活性,为外胚间充质来源的混合细胞,其中含有干细胞特性的具有多向分化潜能的牙囊细胞,有作为组织工程种子细胞的可能,为运用于牙周组织再生提供了实验依据。