【摘 要】
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目的观察以pIRES2-EGFP质粒为载体的PIN1反义基因转染对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。方法用不同量(0、20、50、100、200、250μL)的以pIRES2-EGFP质粒为载体包装的反义PIN1
【机 构】
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武汉华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科,武汉华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科,武汉华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科 430030,430030,430030
【出 处】
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The Chinese-German Journal of Clinical Oncology
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目的观察以pIRES2-EGFP质粒为载体的PIN1反义基因转染对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。方法用不同量(0、20、50、100、200、250μL)的以pIRES2-EGFP质粒为载体包装的反义PIN1基因转染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,收集转染前后的培养细胞和上清液,用MTT法观测转染前后细胞生长曲线;用流式细胞仪观测细胞生长周期变化和细胞凋亡情况;用免疫印迹法(Western-blot)检测Pinl蛋白的表达变化;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PIN1mRNA表达变化。结果MTT法和流式细胞仪显示反义PIN1基因转染能抑制细胞生长,促进其凋亡;Western-Blot结果表明转染反义Pin1基因的量越多,其灰度越低,测得空白对照组及不同量(0、20、50、100、200、250μL)的转染基因组其相应的吸光度比值分别为0．854±0．136、0．866±0．138、0．732±0．154、0．611±0．121、0．547±0．109、0．398±0．113、0．320±0．151,差异有显著性(P<0．05);RT-PCR检测其灰度比值分别为0．983±0．125、0．988±0．127、0．915±0．157、0．786±0．125、0．608±0．124、0．433±0．130、0．410±0．158,差异有显著件(P<0．05)。结论反义Pin1基因可封闭Pin1mRNA,使已转染反义Pin1基因的MG-63细胞表达的Pin1蛋白减少,从而抑制人骨肉瘤细胞MG- 63增殖。
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