【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LNC01309对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制.方法 收集2018年2月—2019年6月在解放军总医院第六医学中心手术治疗的12例肝细胞癌(以下简称肝癌)患者标本及对应的癌旁组织,采用荧光定量PCR方法检测LNC01309的相对表达量.利用荧光定量PCR法检测LNC01309在人肝癌细胞系(Hep G2、SNU-398和Hep 3B)和人永生化正常肝细胞系(THLE-2)中的表达水平.在肝癌细胞Hep G2中过表达LNC01309,分为质粒对照组(pE
【机 构】
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安徽医科大学海军临床学院,合肥230032;解放军总医院第六医学中心肿瘤内科,北京100048;安徽医科大学海军临床学院,合肥230032;解放军总医院第六医学中心肿瘤内科,北京100048
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目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LNC01309对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制.方法 收集2018年2月—2019年6月在解放军总医院第六医学中心手术治疗的12例肝细胞癌(以下简称肝癌)患者标本及对应的癌旁组织,采用荧光定量PCR方法检测LNC01309的相对表达量.利用荧光定量PCR法检测LNC01309在人肝癌细胞系(Hep G2、SNU-398和Hep 3B)和人永生化正常肝细胞系(THLE-2)中的表达水平.在肝癌细胞Hep G2中过表达LNC01309,分为质粒对照组(pEXP-control)和过表达组(pEXP-LNC01309).采用CCK-8检测各组细胞增殖变化,采用划痕愈合试验和Transwell试验检测各组细胞迁移能力.利用RNA免疫共沉淀试验检测LNC01309与RBM38的相互作用(分组为IgG组和RBM38抗体组).利用放线菌酮追踪分析检测LNC01309对于RBM38蛋白稳定性的影响.在肝癌细胞Hep G2中过表达RBM38进行回复试验,采用CCK-8试验、划痕愈合试验和Transwell试验,分别检测细胞增殖和迁移能力的变化.计量资料两组间比较采用t检验.结果 LNC01309在肝癌组织中的平均表达水平高于癌旁组织(4.225±2.285 vs 1.541±0.530,t=3.618,P=0.004).LNC01309在肝癌细胞(Hep G2、SNU-398和Hep 3B)中的相对表达水平亦均高于正常肝细胞(THLE-2)(t值分别为4.231、6.489、14.480,P值均<0.05).过表达LNC01309的Hep G2细胞(t=9.172,P<0.001)相对于对照组,细胞的生长速度明显上升(第96小时OD450值:1.885±0.107 vs 2.527±0.234,t=4.330,P=0.012),迁移能力上调(划痕愈合试验:11.65％ ±2.40％vs 35.66％ ±4.90％,t=9.837,P<0.001;Transwell试验:100.00％ ±3.11％vs 161.00％ ±35.93％,t=4.399,P=0.005);然而过表达LNC01309诱导的肝癌细胞增殖和迁移能力的上调效应,都能够被RBM38部分抑制(第96小时OD450值:2.500±0.227 vs 1.913±0.282,t=2.812,P=0.048;168.00％ ±9.43％vs117.20％ ±18.03％,t=6.622,P<0.001).相对于IgG对照组,RBM38抗体能够显著富集沉淀LNC01309(t=3.846,P=0.031).放线菌酮试验结果显示,过表达LNC01309组细胞中RBM38蛋白稳定性显著下调(t=8.038,P=0.001).结论 新发现的LNC01309通过与RBM38的相互作用降低了RBM38蛋白稳定性,促进肝癌细胞的增殖与迁移.
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