蛋白激酶B1去类泛素化修饰抑制肝癌的增殖和转移

• 作 者: 盛凤 沈依萌 万乔浩 李艳霞 马晓芳 姜忠敏 张殿英 刘晓智 吴问汉
• 机 构: 300450 天津市第五中心医院中医科,100034 北京大学第一医院普通外科,100034 北京大学第一医院普通外科,300450 天津市第五中心医院中心实验室,300450 天津市第五中心医院中心
• 出 处: 中华肿瘤杂志
• 发表日期: 2017年39期
• 关键词: 肝肿瘤 小泛素相关修饰蛋白1 蛋白激酶B1 细胞增殖 肿瘤转移

目的

探讨沉默泛素载体蛋白9(Ubc9)基因表达诱导蛋白激酶B1(AKT1)去类泛素化修饰，及其对肝癌细胞增殖和转移的影响。

方法

利用RNA干扰技术沉默HepG2肝癌细胞Ubc9基因表达，Western blot法检测Ubc9、小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)和蛋白激酶B1(AKT1)蛋白表达水平，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测HepG2细胞增殖活性，细胞划痕实验和Transwell方法检测细胞迁移能力。建立荷瘤鼠模型，测量肿瘤体积并绘制生长曲线，解剖肿瘤组织并称重比较。采用原位细胞凋亡实验检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫组化法检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP－2)和MMP－9的表达情况。

结果

siR－Ubc9基因转染可使HepG2细胞中Ubc9、共轭SUMO1、游离SUMO1和AKT1蛋白水平均明显下降(均P<0.05)。对照组、siR－neg组和siR－Ubc9组的细胞增殖指数分别为53.19%、54.25%和39.17%，细胞迁移距离分别为(59.47±4.66)μm、(56.56±5.37)μm和(34.57±6.61)μm，发生迁移的细胞数量分别为(89.44±8.36)个/视野、(93.84±8.79)个/视野和(41.67±5.39)个/视野，siR－Ubc9组与对照组和siR－neg组差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、siR－neg组和siR－Ubc9组的皮下肿瘤重量分别为(3.78±0.69)g、(3.72±0.72)g和(2.09±0.61)g，细胞凋亡率分别为(7.79±2.21)%、(6.45±2.48)%，和(33.59±5.44)%，siR－Ubc9组与对照组和siR－neg组差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组和siR－neg组肿瘤组织中PCNA、MMP－2和MMP－9蛋白均高表达，而siR－Ubc9组肿瘤组织中PCNA、MMP－2和MMP－9蛋白表达均低表达，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

结论

通过沉默肝癌细胞中Ubc9基因表达能够诱导AKT1去SUMO化修饰，进而抑制肝癌细胞的增殖和转移，为未来肝癌基因治疗提供了新的借鉴方法。