【摘 要】
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目的探讨诱导型一氧化氮合酶抑制剂1 400W减轻人肝内胆管上皮细胞缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法对数生长期的人肝内胆管上皮细胞(HIBEC)以合适的密度接种于培养板中，将细胞分为3组：对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血再灌注＋1 400W组(I/R＋1 400W组)。C组正常培养，I/R组和I/R＋1 400W组细胞置于三气培养箱中12h模拟缺血，然后再正常培养6h模拟再灌注；I/
【机 构】
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郑州大学第一附属医院肝胆胰外科 河南省器官移植医学工程技术中心 郑州市肝胆胰疾病与器官移植医学重点实验室 郑州市器官移植技术与应用工程重点实验室,郑州大学第一附属医院肝胆胰外科 河南省器官移植医学工程
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目的探讨诱导型一氧化氮合酶抑制剂1 400W减轻人肝内胆管上皮细胞缺血再灌注损伤的作用及其机制。
方法对数生长期的人肝内胆管上皮细胞(HIBEC)以合适的密度接种于培养板中，将细胞分为3组：对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血再灌注＋1 400W组(I/R＋1 400W组)。C组正常培养，I/R组和I/R＋1 400W组细胞置于三气培养箱中12h模拟缺血，然后再正常培养6h模拟再灌注；I/R＋1 400W组于缺血缺氧前加入终浓度为100μmol/L的1 400W。再灌注结束后收集细胞及培养液，采用CCK-8法检测细胞活力，微板法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平，Western blot法测定内质网应激(ERS)相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶12(Caspase-12)、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein，GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein，CHOP)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的表达水平。
结果与C组细胞相比，I/R组和I/R＋1 400W组细胞活力显著降低(53.8±2.3)%和(66.5±2.8)%，(P<0.05)，细胞培养液LDH显著升高(287.4±9.0)U/L和(212.0±8.3)U/L(P<0.05)，细胞凋亡水平显著升高(27.5±2.3)%和(18.3±1.8)%(P<0.05)，Caspase-12、GRP78、CHOP和iNOS的表达升高(P<0.05)；与I/R组相比，I/R＋1 400W组细胞活力升高，细胞培养液LDH含量、凋亡水平、Caspase-12、GRP78、CHOP和iNOS的表达降低(P<0.05)。
结论1 400W可减轻人肝内胆管上皮细胞缺血再灌注损伤，其机制可能与抑制内质网应激有关。
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