谷氨酰胺合成酶腺苷酰化位点的定点突变和产胺的初步研究

• 作 者: 黄星 曾行 刘铭 龚博 胡淼 曹竹安
• 机 构: 清华大学化学工程系
• 出 处: 过程工程学报
• 发表日期: 2008年1期
• 关键词: 谷氨酰胺 大肠杆菌 谷氨酰胺合成酶 腺苷化位点 glutamine E. coli glutamine synthetase putative adeny
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（编号：20506012）,国家重点基础研究发展规划（973）基金资助项目（编号：2003CB716007）

为解决谷氨酰胺合成酶腺苷酰化修饰失活的问题，利用基因定点突变的方法将谷氨酸棒杆菌的谷氨酰胺合成酶（Glutamine Synthetase，GS）腺苷酰化位点由Tyr405突变为Phe405，并在大肠杆菌中获得突变后GS的表达．对比腺苷酰化位点突变前后的重组大肠杆菌pET-3a／GSI和pET-3a／GSIM在高氨环境下的GS活性和谷氨酰胺产量，发现重组菌pET-3a／GSIM在高氨环境下的最大酶活是150U／L，产谷氨酰胺浓度为17．5gm，分别是pET-3a／GSI酶活（30U／L）的5．0倍和产谷氨