【摘 要】
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目的:使用RNA干预来特异性减少核激活因子受体配体的表达从而抑制破骨细胞的形成.方法:实验于2005-01/2006-10在解放军第四军医大学全军骨科研究所完成.①构建由U6启动子引导
【机 构】
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解放军第四军医大学西京医院全军骨科研究所,陕西省西,安市,710032
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目的:使用RNA干预来特异性减少核激活因子受体配体的表达从而抑制破骨细胞的形成.方法:实验于2005-01/2006-10在解放军第四军医大学全军骨科研究所完成.①构建由U6启动子引导产生小干预RNA的质粒载体mU6pro-dsRANKL.②按0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0μg的梯度将质粒mU6pro-dsRANKL及对照质粒mU6pro转染大鼠骨髓基质细胞,48 h后提取细胞总RNA.③采用Northern blot法检测,以核激活因子受体配体与内参β-肌动蛋白扩增产物的吸光度比值来反映核激活因子受体配体mRNA的表达情况.④再将质粒mU6pro-dsRANKL按0,1.0,2,3μg转染破骨细胞,抗酒石酸染色显微镜下观察.结果:①Northern blot结果:显示转染骨髓基质细胞后细胞中核激活因子受体配体mRNA的表达量随着质粒载体量的增加而减少.②破骨细胞抗酒石酸染色显示:破骨细胞的数量也随着质粒载体量的增加而减少.结论:U6启动子引导产生小干预RNA的质粒载体能有效的减低核激活因子受体配体的表达从而抑制破骨细胞的形成.
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