【摘 要】
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目的 分析N6甲基腺苷(m6A)甲基转移酶3(methyltransferase-like 3,METTL3)和miR-127在非小细胞肺癌(non small cell lung cancer cells,NSCLC)细胞系中的表达及其相关性,并探究METTL3介导miR-127调控非小细胞肺癌自噬的作用机制.方法 采用qRT-PCR法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B与非小细胞肺癌细胞HCC827,A549和H460中METTL3和miR-127的表达水平;通过Linked Domics数据库筛选出肺癌
【机 构】
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柳州市人民医院心胸外科,广西柳州 545006
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目的 分析N6甲基腺苷(m6A)甲基转移酶3(methyltransferase-like 3,METTL3)和miR-127在非小细胞肺癌(non small cell lung cancer cells,NSCLC)细胞系中的表达及其相关性,并探究METTL3介导miR-127调控非小细胞肺癌自噬的作用机制.方法 采用qRT-PCR法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B与非小细胞肺癌细胞HCC827,A549和H460中METTL3和miR-127的表达水平;通过Linked Domics数据库筛选出肺癌中与miR-127共表达的基因,并分析METTL3和miR-127之间的相关性;选择H460细胞传代培养至对数生长期后,将浓度接近的细胞随机分为三组,分别转染METTL3-siR,NC-siR及Control,验证转染后H460细胞中METTL3和miR-127表达;通过吖啶橙染色,Lyso-Tracker Red染色观察METTL3对细胞自噬的影响;利用Western blot检测PTEN,AKT,mTOR,ULK1,Beclin-1等自噬相关蛋白的表达.结果 非小细胞肺癌细胞HCC827,A549,H460中METTL3相对表达分别为1.35±0.17,1.54±0.11和1.78±0.21,明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达水平(0.91±0.11),差异有统计学意义(F=34.037,P=0.002).非小细胞肺癌细胞HCC827,A549,H460中miR-127相对表达分别为1.56±0.21,1.85±0.19和2.11±0.25,较正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达(1.02±0.20)亦显著升高,差异有统计学意义(F=28.152,P=0.005).肺癌中METTL3与miR-127共同表达呈正相关性(r=0.452,P<0.001).METTL3-siR组细胞中METTL3表达水平(0.61±0.15)较Control组(1.71±0.28)和NC-siR组(1.65±0.19)显著降低,差异有统计学意义(F=78.357,P<0.001).METTL3-siR组细胞中miR-127表达水平(0.48±0.15)较Control组(2.02±0.33)和NC-siR组(1.97±0.25)亦显著下降,差异有统计学意义(F=105.216,P<0.001);吖啶橙和Lyso-Tracker Red染色分别观察到METTL3-siR组细胞酸性自噬小泡增多,自噬溶酶体数量也明显增加.与Control组和NC-siR组相比,METTL3-siR组细胞中PTEN,ULK1,Beclin1蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(F=62.420～175.615,均P<0.001);p-AKT和p-mTOR表达水平显著下降,差异均有统计学意义(F=148.781,87.147,均P<0.001).结论 METTL3和miR-127在非小细胞肺癌细胞系中均呈高表达,且它们之间呈正相关性,沉默METTL3基因可以抑制miR-127表达,促进非小细胞肺癌H460细胞发生自噬,其调控机制可能与PTEN/AKT/mTOR通路有关.
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