【摘 要】
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目的 观察重组蛋白P29 (rP29)对细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路的作用. 方法 36只雌性BALB/c小鼠随机分为rP29免疫组(rP29组)、佐剂组、PBS
【机 构】
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宁夏医科大学基础医学院病原生物与医学免疫学教研室,银川,750004;宁夏医科大学科技中心,银川,750004
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目的 观察重组蛋白P29 (rP29)对细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路的作用. 方法 36只雌性BALB/c小鼠随机分为rP29免疫组(rP29组)、佐剂组、PBS组,每组12只.rP29组小鼠皮下注射rP29蛋白(10 μg/只,与等体积弗氏佐剂乳化),第2和4周各加强免疫1次;佐剂组、PBS组仅注射相应的佐剂或PBS.末次免疫后2周,3组小鼠均腹腔接种细粒棘球蚴原头节(1 500个/只)进行攻击感染.感染后12周,剖杀小鼠,分离肝脏组织,提取肝脏组织mRNA,实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏组织中TGF-β1基因的相对表达水平,蛋白质印迹(Western blotting)检测小鼠肝脏组织中TGF-β/Smad信号通路下游相关蛋白TGFβ-RⅠ、TGFβ-RⅡ、p-Smad2,3、Smad4、Smad7的表达水平. 结果 实时荧光定量PCR检测结果显示,佐剂组、PBS组和rP29组小鼠肝脏组织中的TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为0.98±0.42、1.71±0.29和1.24±0.56,rP29组低于PBS组(P＜0.01),高于佐剂组,但无统计学意义.Westem blotting检测结果显示,rP29组小鼠肝脏组织TGF-β1蛋白表达灰度值为372.04±0.01,低于PBS组(673.02±0.06),高于佐剂组(213.69±0.31).小鼠肝脏组织TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的检测结果显示,rP29组TGF-β-RⅠ、TGF-β-RⅡ、p-Smad 2,3、Smad 4的灰度值分别为357.59±0.83、289.07±0.21、204.06±0.19、396.11±0.01,低于PBS组(496.89±0.09、378.41±0.01、428.11±0.29、566.95±0.21),高于佐剂组(171.99±0.82、185.77±0.09、128.09±0.08、205.87±0.59).rP29免疫组Smad 7蛋白灰度值为278.89±0.12,高于PBS组(142.32±0.07),低于佐剂组(384.17±0.51). 结论 rP29能够降低细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织中TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平;下调TGF-β/Smad下游信号通路相关蛋白TGF-β-RⅠ、TGF-β-RⅡ、p-Smad 2,3和Smad 4的表达,上调Smad 7的表达.
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