目的 探讨小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)的体外扩增方法及扩增后Tregs的免疫功能.方法 利用免疫磁珠法分离小鼠Tregs;采用anti-CD3mAb+rIL-2和Allo-APC+rIL-2两种方法进行体外扩增,通过TRANSWELL培养系统、细胞因子表达及CFSE染色标记等方法检测Tregs免疫抑制作用的机制.结果 体外分离的Tregs纯度为89.5％;活细胞率约为98％.Tregs扩增的倍数在两组各时间点差异无统计学意义.扩增后CD4+ CD25+T细胞、CD4+T细胞和CD4+ CD25-T细胞的每分钟计数(CPM)分别为1 470、12 700和14 300.混合淋巴细胞反应(MLR)中当CD4+:CD25+T细胞的比例为1∶1时,抑制率为79％,比例为8∶1时,抑制率为33％.CFSE标记后,进入分裂周期的CD4+T细胞的百分比在未加入CD4+ CD25+T细胞组为83.7％,加入CD4+ CD25+T细胞组为31.7％,差异具有统计学意义(P=0.0006).CD4+ CD25+T细胞对CD4+T细胞的增殖抑制率在Transwell和Non-Transwell的培养系统中分别为＜5％和95％.Transwell培养组中IL-2含量高于Non-Transwell组,差异具有统计学意义[Transwell培养组为(158.33±2.08)pg/mL,Non-Transwell组为(23.00±2.00) pg/mL,P ＜0.0001].结论 采用免疫磁珠法分离小鼠Tregs可行,Tregs可有效扩增;Tregs的作用机制为抑制CD4+T细胞的增殖及抑制CD4+T细胞分泌IL-2;其抑制作用需要细胞-细胞间接触;体外扩增后的Tregs仍具有免疫特性,其体外免疫抑制作用增强。
小鼠CD4+ CD25+免疫调节性T细胞体外扩增及功能检测的研究
【摘 要】
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目的 探讨小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)的体外扩增方法及扩增后Tregs的免疫功能.方法 利用免疫磁珠法分离小鼠Tregs;采用anti-CD3mAb+rIL-2和Allo-APC+rIL-2两种方法进行体外扩增,通过TRANSWELL培养系统、细胞因子表达及CFSE染色标记等方法检测Tregs免疫抑制作用的机制.结果 体外分离的Tregs纯度为89.5％;活细胞率约为98％.
【机 构】
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130021长春,吉林省人民医院肿瘤科,130021长春,吉林省人民医院血液风湿科,130021长春,吉林省人民医院血液风湿科,130021长春,吉林省人民医院血液风湿科
【出 处】
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国际免疫学杂志
【发表日期】
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2014年37期
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