论文部分内容阅读
【摘要】目的：探析荧光定量PCR检测HBV核酸诊断的临床价值。方法：选取2020年1月至12月期间本站就诊的200例体检者，均需要采集HBV血清样本，并进行荧光定量PCR核酸检测及免疫标志物检测。观察荧光定量PCR检测及免疫标志物检测相关结果结果：200例HBV血清样本中，102例HBV-DNA样本呈阴性，98例为阳性，阳性最低定量为1.87*103/mL，阳性最高定量为9.47*103/mL，HBV免疫标志物检出阳性率104例（52.00%）；其中大三阳（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）组样本48例（46.15%），小三阳（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）样本56例（53.85%）；采用HBV-DNA定量检测，大三阳阳性检出率（46.08%）；小三阳性检出率（53.92%）；两组样本阳性检出率无统计学差异（P>0.05）。结论：荧光定量PCR检测HBV核酸诊断临床效果显著，可诊断结果较为精准，可有效反映出HBV在体内的复制结果，相较于免疫标志物检测具有更好的灵敏度及特异性，值得临床推广。
【关键词】荧光定量PCR；HBV；核酸诊断；临床价值
[中图分类号]R450 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）07-0151-02
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）是通过肝细胞膜上钠离子-牛磺胆酸一协同转运蛋白受体侵入肝细胞，引起病毒性免疫应答，导致肝细胞出现炎症、损害或坏死。主要经由母婴、血液、性接触途径进行传播，传播率较广，若不及时干预控制将可能导致病毒感染率明显增加，感染者近战位肝硬化或肝癌。因此为了降低HBV感染风险，保证我国国民安全，我们有必要采取积极预防措施[1]。目前临床采用保护易感人群、管理传染源、切断传播途径方法，而精确检测HBV确诊患者及潜在高危人群可以有利于疫情防控人员管理的高效率及高质量。HBV核酸诊断检测可以直接反映机体内HBV复制情况，进而获得更为精确的诊断结果，更适用于临床诊断[2]。随着乙型肝炎流行病学的变化，临床对HBV核酸诊断提出了更高标准，而荧光定量PCR具有较高的灵敏度、操作简便等优势，在HBV核酸检测中应用越来越广泛。基于此，本研究将对荧光定量PCR检测HBV核酸诊断的临床价值进行分析，试验结果报道如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 选取2020年1月至12月期间本站就诊的200体检者，采集HBV血清样本并进行荧光定量PCR核酸检测及免疫标志物检测。体检者资料如下：男123例、女77例，年龄21～57岁，平均年龄（39.45±2.73）岁。
纳入标准：年龄为18-75岁；体检者均签署知情同意书。排除标准：合并肝硬化、肝功能不全等相关疾病者；存在精神意识障碍或认知障碍者。
1.2方法 所有体检者均需要采集HBV血液样本，并进行荧光定量PCR核酸检测及免疫标志物检测。免疫标志物检测操作如下：采用FAME全自动酶分析仪（来源：瑞士HAMILTON）及HBV-M试剂盒（ELISA）（来源：厦门新创科技有限公司）进行检测，按照说明书进行严格操作，依据检测结果将乙肝患者分为四类：大三阳（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、小三阳（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）、HBsAg单独+、HBsAb单独+（注：+表明为阳性）。
荧光定量PCR检测方法操作如下：采用荧光定量 PCR仪（来源：罗氏Cobas-z480）及HBV DNA荧光定量PCR试剂盒（来源：上海科华生物工程股份有限公司），提取HBV-DNA，直接在PCR反应管中加入5 μL 核酸释放剂，并加入同等剂量标本（血清、血浆、标准品、对照品及质控品），运用移液枪反复吹打混匀后，静置10 min再加入40 μL 配置好的反应液，再放置于荧光定量 PCR 仪上进行PCR扩增及核酸检测，热循环条件为：93℃预变性2 min，94℃5 s，60℃35 s，循环40次，再60℃时收集荧光信号，再进行自动分析计算定量结果。
1.3观察指标 观察HBV-DNA定量检测结果情况。分析HBV免疫标志物及DNA定量阳性结果之间的关系：荧光定量PCR检测阳性判断标准为：与阳性模板进行对照，另取10μLPCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，与紫外灯下观察，该扩增产物出现与阳性模板位置相同的特异性条带，HBV-DNA定量拷贝数<1*103/ mL判读为阴性。
1.4统计学方法 将HBV检测结果数据纳入SPSS23.0软件中分析，计数资料（检测结果）采用c2检验，并以率（%）表示件处理，P<0.05为差异显著，有统计学意义。
2 结果
2.1观察HBV-DNA定量检测结果情况 200例HBV血清样本中，102例HBV-DNA样本呈阴性，98例为阳性，阳性最低定量为1.87*103，阳性最高定量为9.47*103，详见表1。
2.2分析HBV免疫标志物及DNA定量阳性结果之间的关系 HBV免疫标志物检出阳性率104例（52.00%）；其中大三阳（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）组样本48例（46.15%），小三阳（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）样本56例（53.85%）；采用HBV-DNA定量检测，大三阳阳性检出率（46.08%）；小三阳性检出率（53.92%）；两组样本阳性檢出率无统计学差异（P>0.05）。详见表2。
3 讨论
HBV感染呈现世界性流行趋势，各地区HBV感染流行强度差异较大，据我国疾控预防控制中心（Centers for Disease Control， CDC）研究调查显示，慢性HBV感染者约7000万例，因此我国防治HBV形势严峻，需要加强HBV诊断、预防工作，积极检测HBV感染标志物，做到早诊断早治疗，降低疾病危害，进而推动世界卫生组织（World Health Organization， WHO）提出的消除病毒性肝炎目标实现。临床主要采用HBV血清标志物进行诊断，通过了解机体免疫状态，间接性反映出病毒复制情况，但该检查手段存在一定局限性，当病毒处于变异状态或窗口期时，出现假阴性结果的概率极高[3]。因此有必要寻找诊断更精确，适用范围更广的诊断技术。
本研究结果显示，HBV免疫标志物检出阳性率与采用HBV-DNA定量检测阳性检出率无统计学差异（P>0.05）。荧光定量PCR属于有效定量检测方法，其工作原理是通过，操作较为简便，可以降低核酸交叉感染风险，且检测性能较高可以满足临床检测需求[4]。且HBV-DNA定量检测可以准确反映出HBV复制具体情况[5]。血清标志物检测（HBV-M）主要是通过反映人体对HBV的免疫反映状态，间接反映出HBV复制情况；而HBV核酸诊断可以直接定量检测，对于临床诊断感染情况及疗效评估有着更好的指导意义。荧光定量PCR检测可以缩短HBV感染后的窗口期，同时对于突变株来说，DNA诊断为监测的唯一可靠指标，同时该技术具有较好的灵敏度及重复性，可以实时监测目的基因扩增数量，定量评估并区分乙肝病毒。
综上所述，荧光定量PCR检测HBV核酸诊断临床效果显著，可诊断结果较为精准，可有效反映出HBV在体内的复制结果，相较于免疫标志物检测具有更好的灵敏度及特异性，值得临床推广。
参考文献
[1] 李育敏， 徐怡， 阚丽娟， 等. 荧光定量PCR测定HBV DNA测量不确定度的评定与应用探讨[J]. 现代检验医学杂志， 2019， 34（3）： 151-155.
[2] 王可可， 杨柯， 赵俊， 等. 基于微流控芯片的荧光定量PCR法快速检测乙肝病毒核酸[J]. 分析科学学报， 2018， 34（4）： 450-454.
[3] 中华医学会感染病学分会， 中华医学会肝病学分会， 等. 慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）[J]. 中国病毒病杂志， 2020， 10（1）： 1-25.
[4] 周丹， 何进才， 李惠贞， 等. 荧光定量PCR仪检测乙型肝炎病毒核酸的性能验证及评价[J]. 检验医学与临床， 2019， 16（1）： 80-84.
[5] 高鑫， 朱武洋， 卢学新. 实时荧光定量PCR在病毒检测中的应用[J]. 中国人兽共患病学报， 2018， 34（7）： 84-91.
[6] 李育敏， 阚丽娟， 张水兰， 等. 荧光定量P CR测定HBV DNA的抗干扰能力评价[J]. 临床检验杂志， 2020， 38（2）： 142-144.
【关键词】荧光定量PCR；HBV；核酸诊断；临床价值
[中图分类号]R450 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）07-0151-02
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）是通过肝细胞膜上钠离子-牛磺胆酸一协同转运蛋白受体侵入肝细胞，引起病毒性免疫应答，导致肝细胞出现炎症、损害或坏死。主要经由母婴、血液、性接触途径进行传播，传播率较广，若不及时干预控制将可能导致病毒感染率明显增加，感染者近战位肝硬化或肝癌。因此为了降低HBV感染风险，保证我国国民安全，我们有必要采取积极预防措施[1]。目前临床采用保护易感人群、管理传染源、切断传播途径方法，而精确检测HBV确诊患者及潜在高危人群可以有利于疫情防控人员管理的高效率及高质量。HBV核酸诊断检测可以直接反映机体内HBV复制情况，进而获得更为精确的诊断结果，更适用于临床诊断[2]。随着乙型肝炎流行病学的变化，临床对HBV核酸诊断提出了更高标准，而荧光定量PCR具有较高的灵敏度、操作简便等优势，在HBV核酸检测中应用越来越广泛。基于此，本研究将对荧光定量PCR检测HBV核酸诊断的临床价值进行分析，试验结果报道如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 选取2020年1月至12月期间本站就诊的200体检者，采集HBV血清样本并进行荧光定量PCR核酸检测及免疫标志物检测。体检者资料如下：男123例、女77例，年龄21～57岁，平均年龄（39.45±2.73）岁。
纳入标准：年龄为18-75岁；体检者均签署知情同意书。排除标准：合并肝硬化、肝功能不全等相关疾病者；存在精神意识障碍或认知障碍者。
1.2方法 所有体检者均需要采集HBV血液样本，并进行荧光定量PCR核酸检测及免疫标志物检测。免疫标志物检测操作如下：采用FAME全自动酶分析仪（来源：瑞士HAMILTON）及HBV-M试剂盒（ELISA）（来源：厦门新创科技有限公司）进行检测，按照说明书进行严格操作，依据检测结果将乙肝患者分为四类：大三阳（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、小三阳（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）、HBsAg单独+、HBsAb单独+（注：+表明为阳性）。
荧光定量PCR检测方法操作如下：采用荧光定量 PCR仪（来源：罗氏Cobas-z480）及HBV DNA荧光定量PCR试剂盒（来源：上海科华生物工程股份有限公司），提取HBV-DNA，直接在PCR反应管中加入5 μL 核酸释放剂，并加入同等剂量标本（血清、血浆、标准品、对照品及质控品），运用移液枪反复吹打混匀后，静置10 min再加入40 μL 配置好的反应液，再放置于荧光定量 PCR 仪上进行PCR扩增及核酸检测，热循环条件为：93℃预变性2 min，94℃5 s，60℃35 s，循环40次，再60℃时收集荧光信号，再进行自动分析计算定量结果。
1.3观察指标 观察HBV-DNA定量检测结果情况。分析HBV免疫标志物及DNA定量阳性结果之间的关系：荧光定量PCR检测阳性判断标准为：与阳性模板进行对照，另取10μLPCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，与紫外灯下观察，该扩增产物出现与阳性模板位置相同的特异性条带，HBV-DNA定量拷贝数<1*103/ mL判读为阴性。
1.4统计学方法 将HBV检测结果数据纳入SPSS23.0软件中分析，计数资料（检测结果）采用c2检验，并以率（%）表示件处理，P<0.05为差异显著，有统计学意义。
2 结果
2.1观察HBV-DNA定量检测结果情况 200例HBV血清样本中，102例HBV-DNA样本呈阴性，98例为阳性，阳性最低定量为1.87*103，阳性最高定量为9.47*103，详见表1。
2.2分析HBV免疫标志物及DNA定量阳性结果之间的关系 HBV免疫标志物检出阳性率104例（52.00%）；其中大三阳（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）组样本48例（46.15%），小三阳（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）样本56例（53.85%）；采用HBV-DNA定量检测，大三阳阳性检出率（46.08%）；小三阳性检出率（53.92%）；两组样本阳性檢出率无统计学差异（P>0.05）。详见表2。
3 讨论
HBV感染呈现世界性流行趋势，各地区HBV感染流行强度差异较大，据我国疾控预防控制中心（Centers for Disease Control， CDC）研究调查显示，慢性HBV感染者约7000万例，因此我国防治HBV形势严峻，需要加强HBV诊断、预防工作，积极检测HBV感染标志物，做到早诊断早治疗，降低疾病危害，进而推动世界卫生组织（World Health Organization， WHO）提出的消除病毒性肝炎目标实现。临床主要采用HBV血清标志物进行诊断，通过了解机体免疫状态，间接性反映出病毒复制情况，但该检查手段存在一定局限性，当病毒处于变异状态或窗口期时，出现假阴性结果的概率极高[3]。因此有必要寻找诊断更精确，适用范围更广的诊断技术。
本研究结果显示，HBV免疫标志物检出阳性率与采用HBV-DNA定量检测阳性检出率无统计学差异（P>0.05）。荧光定量PCR属于有效定量检测方法，其工作原理是通过，操作较为简便，可以降低核酸交叉感染风险，且检测性能较高可以满足临床检测需求[4]。且HBV-DNA定量检测可以准确反映出HBV复制具体情况[5]。血清标志物检测（HBV-M）主要是通过反映人体对HBV的免疫反映状态，间接反映出HBV复制情况；而HBV核酸诊断可以直接定量检测，对于临床诊断感染情况及疗效评估有着更好的指导意义。荧光定量PCR检测可以缩短HBV感染后的窗口期，同时对于突变株来说，DNA诊断为监测的唯一可靠指标，同时该技术具有较好的灵敏度及重复性，可以实时监测目的基因扩增数量，定量评估并区分乙肝病毒。
综上所述，荧光定量PCR检测HBV核酸诊断临床效果显著，可诊断结果较为精准，可有效反映出HBV在体内的复制结果，相较于免疫标志物检测具有更好的灵敏度及特异性，值得临床推广。
参考文献
[1] 李育敏， 徐怡， 阚丽娟， 等. 荧光定量PCR测定HBV DNA测量不确定度的评定与应用探讨[J]. 现代检验医学杂志， 2019， 34（3）： 151-155.
[2] 王可可， 杨柯， 赵俊， 等. 基于微流控芯片的荧光定量PCR法快速检测乙肝病毒核酸[J]. 分析科学学报， 2018， 34（4）： 450-454.
[3] 中华医学会感染病学分会， 中华医学会肝病学分会， 等. 慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）[J]. 中国病毒病杂志， 2020， 10（1）： 1-25.
[4] 周丹， 何进才， 李惠贞， 等. 荧光定量PCR仪检测乙型肝炎病毒核酸的性能验证及评价[J]. 检验医学与临床， 2019， 16（1）： 80-84.
[5] 高鑫， 朱武洋， 卢学新. 实时荧光定量PCR在病毒检测中的应用[J]. 中国人兽共患病学报， 2018， 34（7）： 84-91.
[6] 李育敏， 阚丽娟， 张水兰， 等. 荧光定量P CR测定HBV DNA的抗干扰能力评价[J]. 临床检验杂志， 2020， 38（2）： 142-144.