【摘 要】
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目的 探讨乳杆菌bsh基因的高效表达及胆盐水解酶(BSH)的高活性酶蛋白获得.方法 从本实验室保存的12株乳杆菌菌株中,通过Ca2+沉淀法初筛获得具BSH活性的菌株,根据GenBank上公
【机 构】
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温州医科大学检验医学院、生命科学学院,浙江温州 325035
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目的 探讨乳杆菌bsh基因的高效表达及胆盐水解酶(BSH)的高活性酶蛋白获得.方法 从本实验室保存的12株乳杆菌菌株中,通过Ca2+沉淀法初筛获得具BSH活性的菌株,根据GenBank上公布的16S rRNA同源性最高的乳杆菌的BSH全基因序列,设计特异性引物,PCR扩增获得bsh基因并克隆至表达载体pET-28α,构建BL21-pET-28α-bsh原核表达体系.经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE分析及Western blot验证.结果 研究表明在分子质量大小约35、37 kD处有预期条带出现,初步表明BSH蛋白表达成功.进而对表达各条件进行优化,最佳酶活条件为IPTG浓度0.1 mmol/L、诱导pH 6.5、诱导温度37℃、诱导时间1h.经镍柱亲和层析纯化制备BSH制剂,邻苯三酚红钼法蛋白浓度测定为1446 mg/dL,茚三酮法测酶活性最高可达21248.27 U/ (g· prot),为纯化前的635.4倍.结论 乳杆菌bsh基因可溶性表达成功且高酶活BSH纯化获取为进一步的研究和药物转化奠定基础.
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