黄芩苷对肠上皮细胞缺氧复氧损伤后屏障功能的影响

• 作 者: 任翔 傅廷亮 马明明 冯文玉 程风春 耿磊 郑步峰 刘希杰
• 机 构: 256600 滨州医学院附属医院儿外科,256600 滨州医学院附属医院儿外科,256600 滨州医学院附属医院儿外科,256600 滨州医学院附属医院儿外科,256600 滨州医学院附属医院儿外科,
• 出 处: 中华实用儿科临床杂志
• 发表日期: 2015年30期
• 关键词: 黄芩苷 肠屏障 缺血再灌注 缺氧复氧 紧密连接蛋白

目的

探讨黄芩苷对肠上皮细胞缺氧复氧损伤后屏障功能的影响。

方法

建立大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)缺氧复氧损伤模型。采用3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑嗅盐(MTT)比色法检测细胞增殖，筛选黄芩苷浓度。设立对照组，缺氧复氧组，缺氧复氧＋5.0×10^–3 mol/L黄芩苷组，缺氧复氧＋1.0×10^–3 mol/L黄芩苷组，缺氧复氧＋0.2×10^–3 mol/L黄芩苷组；采用紫外线分光光度计检测细胞上清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平；Western blot方法检测细胞紧密连接蛋白Occludin和Zonula Occludens 1(ZO-1)的表达及核因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平；实时荧光定量-PCR法检测Occludin和ZO-1 mRNA表达水平。

结果

MTT比色法显示黄芩苷可缓解缺氧复氧对细胞增殖的抑制(对照组吸光度值：0.442±0.015，缺氧复氧组：0.256±0.007，缺氧复氧＋5.0×10^–3 mol/L黄芩苷组：0.407±0.008；F＝66.904，P<0.05)。缺氧复氧组较对照组细胞上清中MDA水平增加[对照组：(3.502±0.231) mol/L，缺氧复氧组：(5.541±0.143) mol/L]，SOD水平减少[对照组：(20.073±0.493)×10³ U/L，缺氧复氧组：(13.324±0.081)×10³ U/L]，Occludin和ZO-1的蛋白、mRNA表达量减少，NF-κB(P65)蛋白表达量增加(P均<0.05)。与缺氧复氧组相比，黄芩苷各组随黄芩苷水平升高，细胞上清中MDA水平逐渐减少[缺氧复氧＋5.0×10^–3 mol/L黄芩苷组：(4.320±0.106) mol/L，缺氧复氧＋1.0×10^–3 mol/L黄芩苷组：(4.578±0.080) mol/L，缺氧复氧＋0.2×10^–3 mol/L黄芩苷组：(4.928±0.118)mol/L]，SOD水平增加[缺氧复氧＋5.0×10^–3 mol/L黄芩苷组：(18.462±0.284)×10³ U/L，缺氧复氧＋1.0×10^–3 mol/L黄芩苷组：(16.624±0.364)×10³ U/L，缺氧复氧＋0.2×10^–3 mol/L黄芩苷组：(14.023±0.140)×10³ U/L]，Occludin和ZO-1的蛋白、mRNA表达量增加，NF-κB(p65)蛋白表达量减少(P均<0.05)。

结论

黄芩苷可通过降低NF-κB的活性减轻缺氧复氧对肠上皮细胞屏障的损伤。