【摘 要】
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硫原子在DNA骨架上取代非桥接氧原子的磷硫酰化修饰简称DNA硫修饰(phosphorothioation DNA,PT-DNA/sDNA).PT-DNA 在电泳过程中会出现Dnd 降解表型(DNA degradation phenotype
【机 构】
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上海交通大学生命科学技术学院,上海,200030;北京四海华辰科技有限公司,北京,102600
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硫原子在DNA骨架上取代非桥接氧原子的磷硫酰化修饰简称DNA硫修饰(phosphorothioation DNA,PT-DNA/sDNA).PT-DNA 在电泳过程中会出现Dnd 降解表型(DNA degradation phenotype).Dnd 表型可作为判断菌株DNA上是否含有硫修饰现象的指标之一.目前有几种DNA硫修饰的鉴定方法,但这些方法存在实验周期长、灵敏度低、结果可重现性差等缺点.本研究开发了一种简易的DNA硫修饰的鉴定方法:采用HC1O处理质粒、染色质DNA和硫修饰二核苷,鉴定Dnd表型.实验证明,HC1O对DNA骨架硫具有特异性氧化断裂的化学属性,而对不含硫的DNA无断裂能力;通过探索HC1O对sDNA切割的反应条件,发现HC1O在浓度20?40 μmol/L之间,37℃,30 min水浴后可得到最佳切割条件;此外还证明了HC1O在切割硫修饰核苷酸片段时,对其长度、序列及构象(R-或S-构型)均无选择性.本研究为Dnd表型提供了一种更为便捷、可靠的鉴定方法,为硫修饰相关的研究提供了一定的技术支持.
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