【摘 要】
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哺乳动物细胞受到应激刺激后,会在细胞中形成致密的颗粒状结构,该结构被称为应激颗粒(stress granules,SG),其中G3BP1是应激颗粒重要的组成成分和标志蛋白。为了动态监测SG的
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,西北农林科技大学动物医学院,山东农业大学动物科技学院
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(31872453),国家重点研发计划项目(2017YFD0500800,2018YFD0500100)
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哺乳动物细胞受到应激刺激后,会在细胞中形成致密的颗粒状结构,该结构被称为应激颗粒(stress granules,SG),其中G3BP1是应激颗粒重要的组成成分和标志蛋白。为了动态监测SG的形成情况,构建稳定表达GFP-G3BP1蛋白的HeLa细胞系。首先,扩增G3BP1基因,并将其克隆到慢病毒载体中,从而获得重组质粒Lenti-GFP-G3BP1,利用三质粒慢病毒包装系统包装为表达GFP-G3BP1蛋白的慢病毒颗粒,并感染HeLa细胞,通过嘌呤霉素初步筛选阳性细胞,随后,采用有限稀释法筛选出稳定表达GF
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