【摘 要】
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目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)核心区的siRNA表达载体pSIHBV/C,观察其对HBV复制和表达的影响.方法将构建成功的pSIHBV/C与1.3倍HBV真核表达质粒pHBV1.3共转染HepG2细胞,转染
【机 构】
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重庆医科大学病毒性肝炎研究所,Molecular Oncology Laboratory
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目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)核心区的siRNA表达载体pSIHBV/C,观察其对HBV复制和表达的影响.方法将构建成功的pSIHBV/C与1.3倍HBV真核表达质粒pHBV1.3共转染HepG2细胞,转染后24、48、72 h,用Abbott试剂检测细胞上清中HBsAg和HBeAg,并用免疫荧光染色法观察细胞内病毒核心抗原和表面抗原的表达.结果成功构建了针对HBV核心区的siRNA表达载体pSIHBV/C,并发现它能明显抑制HBsAg和HBeAg的分泌,转染后第2天抑制率达高峰,分别为92%、85%,而随机序列的siRNA无此作用.免疫荧光染色结果也证实转染24 h后,随pSIHBV/C比例的升高,其对HBV抗原表达的抑制作用也随之增加,当pSIRNA/C与pHBV1.3比例为1∶ 20时,pSIHBV/C对细胞内HBsAg和HBcAg表达的抑制作用最强.结论乙型肝炎病毒核心区的siRNA具有显著和特异的抗HBV复制和表达的作用.
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