【摘 要】
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目的:研究microRNA-449a(miR-449a)对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:在BE(2)-C细胞中过表达miR-449a后通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PC
【机 构】
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西安市儿童医院普外一科,陕西西安710002
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目的:研究microRNA-449a(miR-449a)对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:在BE(2)-C细胞中过表达miR-449a后通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)分析基因表达水平的变化,MTT分析细胞活力,克隆形成试验观察肿瘤细胞增殖能力,同时,采用microRNA靶标预测和功能注释数据库miRDB预测miR-449a潜在靶向基因,对靶基因MDM4进行过表达和干扰表达后,Western blot分析相关蛋白表达水平,流式细胞术分析细胞凋亡.结果:miR-449a过表达抑制细胞增殖及克隆形成.经过软件预测和实验验证,证实MDM4为miR-449a的1个靶基因.另外干扰MDM4表达后亦可以抑制细胞增殖和克隆形成.过表达MDM4可以抵消由转染miR-449a模拟物所引起的细胞凋亡和p53蛋白量的增加.miR-449a可以促进BE(2)-C细胞凋亡,但是在稳定干扰p53表达的细胞株没有观察到这种效应.结论:miR-449a通过靶向调控MDM4基因进而稳定p53蛋白从而促进肿瘤细胞凋亡,提示miR-449a可能作为神经母细胞瘤潜在治疗靶标之一.
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