【摘 要】
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目的 构建和表达细粒棘球绦虫重组卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162.方法 通过基因工程技术将细粒棘球绦虫抗原EgG1Y162的编码基因与大肠埃希菌(E.coli)-分枝杆菌穿梭表达质粒载
【机 构】
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新疆重大疾病医学重点实验室—省部共建国家重点实验室培育基地,新疆医科大学第一附属医院,乌鲁木齐 830011;新疆医科大学基础医学院,乌鲁木齐,830011
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目的 构建和表达细粒棘球绦虫重组卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162.方法 通过基因工程技术将细粒棘球绦虫抗原EgG1Y162的编码基因与大肠埃希菌(E.coli)-分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV361重组,并转化E.coli后进行扩增.重组质粒pMV-EgG1Y162经PCR和双酶切鉴定后,进行测序.将鉴定正确的rpMV-EgG1Y162通过电穿孔技术转化至感受态BCG菌株中,构建rBCG-EgG1Y162.经PCR和双酶切鉴定正确后,扩增培养2周,并于45℃放置30 min,诱导目的蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达情况,并以兔抗原核表达重组蛋白EgG1Y162血清为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析.结果 重组质粒rpMV-EgG1Y162经PCR扩增和双酶切后,均获得约360 bp的EgG1Y162目的基因片段,与预期片段长度一致,测序结果表明插入序列正确.将其通过电穿孔转化BCG菌株后,rBCG-EgG1Y162生长良好,经酶切和PCR鉴定正确.SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的表达产物的相对分子质量(Mr)约为71 000.结论 构建和表达了细粒棘球绦虫rBCG-EgG1Y162菌株.
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