【摘 要】
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髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)是一种血红素辅基蛋白酶,是血红素过氧化物酶超家族成员之一,参与多种疾病的发生和发展过程.本研究旨在克隆小鼠MPO基因CDS全长序列,检测
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学生命科学与技术学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州730070
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髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)是一种血红素辅基蛋白酶,是血红素过氧化物酶超家族成员之一,参与多种疾病的发生和发展过程.本研究旨在克隆小鼠MPO基因CDS全长序列,检测该基因在小鼠神经细胞的表达谱.首先利用RT-PCR法与克隆载体克隆小鼠MPO基因CDS全长序列,对其进行生物信息学分析;然后构建真核表达载体pEGFP-C1-MPO,瞬时转染小鼠神经元细胞,通过qRT-PCR、Western blot和免疫荧光检测MPO在神经细胞的表达及分布规律.结果显示,小鼠MPO基因CDS全长2 171 bp,编码718个氨基酸,与章鱼、美洲灰熊、马、人、非洲爪蟾、扬子鳄等物种的氨基酸序列同源性均高于79.25％.转染细胞后,试验组MPO的mRNA和蛋白表达水平极显著高于阴性对照组(P＜0.01),表明小鼠MPO基因的真核表达载体pEGFP-C1-MPO构建及转染成功;免疫荧光结果显示MPO蛋白主要分布于神经元细胞质中.过表达MPO后,nNOS的mRNA水平显著高于对照组(P＜0.05),而NADPH表达水平显著低于对照组(P＜0.05).总之,在体外过表达MPO可促进nNOS表达,抑制NAD-PH的表达,这为今后深入研究MPO的功能奠定理论基础.
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