【摘 要】
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目的 研究Runt相关转录因子1(Runt-related transcription factor 1,RUNX1)对牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)增殖、成骨向分化、成脂向分化的作用.方法 转染建携带
【机 构】
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口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院 ,成都 610041
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目的 研究Runt相关转录因子1(Runt-related transcription factor 1,RUNX1)对牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)增殖、成骨向分化、成脂向分化的作用.方法 转染建携带目的基因RUNX1和绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体至DPSC 48 h后,通过荧光标记GFP和Western blot确定转染效率.过表达RUNX1后,CCK-8法和克隆形成实验检测DPSC增殖能力和克隆形成能力,流式细胞术检测DPSC细胞周期.转染沉默RUNX1的siRNA至DPSC.矿化诱导后,通过碱性磷酸酶活性检测和茜素红染色,观察过表达/沉默RUNX1对DPSC成骨向分化的影响;成脂诱导后,通过油红O染色,观察过表达/沉默RUNX1对DPSC成脂向分化的影响.结果 转染慢病毒后RUNX1蛋白在DPSC中过表达,荧光检测示慢病毒转染成功,稳定表达GFP蛋白的细胞均在70％以上.过表达RUNX1后DPSC细胞增殖速度增快、克隆形成能力增强、S期细胞比例增加(P<0.05).RUNX1过表达后DPSC的碱性磷酸酶活性和矿化结节形成能力增强,脂滴减少(P<0.05);RUNX1敲低后DPSC的碱性磷酸酶活性和矿化结节形成能力减弱,脂滴增加(P<0.05).结论 RUNX1促进DPSC增殖和成骨向分化,抑制DPSC成脂向分化.
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