用滚环扩增与大引物PCR法高效构建定点突变序列

• 作 者: 赵松子 沈向群
• 机 构: 沈阳农业大学园艺学院
• 出 处: 江西农业学报
• 发表日期: 2009年08期
• 关键词: 滚环扩增 定点突变 PCR 大引物
• 基金项目: 中科院“百人计划”;“863”项目(2006AA10A104)

建立了一种简单、快捷的高效定点诱变方法。第一轮PCR反应中,上游引物和突变引物先以1∶10的比例进行不对称PCR,提高大引物突变比例。第二轮PCR反应以滚环扩增产生的单链DNA作为大引物PCR反应的模板,不需要优化PCR反应的条件,通过一般的反应条件就可得到大量PCR产物,并且诱变的成功率可达100%。