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【摘要】目的观察麻黄附子甘草汤同时煎煮时的减毒效果。方法以附子主要毒性成分乌头碱、次乌头碱及新乌头碱为研究对象，观察麻黄附子甘草汤同时煎煮时的减毒效果。结果与单一的附子提取液相比，附子与麻黄或甘草共同煎煮后，其毒性成分都有了明显的下降，且三者同时煎煮时的减毒效果最优。结论麻黄附子甘草汤同时煎煮能达到有效的减毒效果，该配伍方式值得临床推广和使用。
【关键词】麻黄；附子；甘草；减毒效果
麻黄附子甘草汤收载于《伤寒论》中，临床上主要用来治疗坐骨神经痛、恶寒发热等疾病，由麻黄、附子、甘草以一定的比例配伍组成，其中，麻黄发汗解表，附子助阳温经，甘草驱寒止痛[1]。《神农本草经》中记载，附子性大热、有大毒，其主要毒性成分为乌头碱、次乌头碱和新乌头碱等双酯类生物碱，主要对心脏、中枢神经系统有明显的毒害作用[2]。临床主要通过配伍和炮制来降低附子的毒性，本文以双酯类生物碱为研究对象，觀察麻黄附子甘草汤同时煎煮时的减毒效果，为药物的配伍及临床用药提供参考并奠定基础。
1仪器与试药
LC-2010A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；BS224S型电子天平（德国Sartorius公司）；麻黄、附子、甘草均由广东省药材公司中药饮品厂提供；乌头碱、新乌头碱和次乌头碱对照品购于中国药品生物制品检定所，乙醇、氯仿、甲醇、氨水为分析纯。
2方法与结果
2.1附子单煎液的提取取27g附子于锥形瓶中，加入220ml pH值为2.5酸性水，煎煮30min后，过滤并收集滤液，如此重复2次，合并滤液，氨水调pH值至9.0左右，再用同体积的氯仿萃取3次，以旋转蒸发仪除去分离的氯仿后，25ml无水乙醇复溶，混匀，备用。
2.2麻黄附子甘草汤的煎煮分别称取不同处方比例的麻黄、附子、甘草，用水煎煮。样品1：18g麻黄、27g附子，用水煎煮30min，即得；样品2：18g甘草、27g附子，用水煎煮，30min，即得；样品3：18g麻黄、18g甘草与27g附子，用水煎煮30min。
2.3样品中煎液的提取将“2.2”项下各样品过滤，收集滤液，用氨水将滤液pH值调至9.0，再用等体积的氯仿萃取3次，以旋转蒸发仪除去分离的氯仿，25ml乙醇复溶后，即得配伍溶液1-8。
2.4双酯类生物碱的测定
2.4.1色谱条件[3]色谱柱：Diamonsil C18（2）（5 μm，250×4.6 mm）；流动相：A0.1%三乙胺-B甲醇，梯度洗脱：0-20min，55%的A，20-55min，70%的A，55-60min，55的A；流速：1ml·min-1，检测波长：235nm；柱温30℃；进样体积：20μL。
2.4.2混合对照品溶液的配制称取乌头碱对照品10.2mg，次乌头碱对照品10.4mg以及新乌头碱对照品10.0mg置于10ml的容量瓶中，加适量甲醇溶解后，用甲醇继续定容至刻度，摇匀，于冰箱中保存，备用。
2.4.3标准曲线及线性范围分别吸取上述混合对照品容液0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0，置10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，在“2.4.1”项色谱条件下进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得乌头碱、次乌头碱及新乌头碱的回归方程分别为Y=2.23×106-4201.3（R=0.9999）、Y=2.38×106+5621.9（R=0.9997）、Y=2.63×106-4738.2（R=0.9999），结果表明乌头碱、次乌头碱及新乌头碱分别2.04-204μg/ml、2.08-208μg/ml、2.0-200μg/ml的范围内，浓度与峰面积线性关系良好。
2.4.4样品的测定取附子单煎液及3种配伍溶液适量，经0.45μm滤膜过滤后，取续滤液，按“2.4.1”项下色谱条件下进样，根据标准曲线计算乌头碱、次乌头碱及新乌头碱的浓度，见表1。
3讨论
附子为中药中的“回阳救逆第一品”，但其药效往往与毒性共存。附子中的主要毒性成分为二萜类的生物碱，其中双酯型乌头碱的毒性最大，活性最强，据报道，乌头碱经小鼠皮下注射的半数致死量为0.295mg/kg，乌头碱、次乌头碱及新乌头碱是引起心律失常的主要原因。目前临床上常通过炮制和配伍的方法来降低附子的毒性，如将附子与甘草、干姜、大黄、人参配伍，能有效降低乌头碱类的毒性成分含量，而炮制主要是通过煎煮时的水解作用，将双酯类乌头碱转变为毒性更小甚至是无毒的其他生物碱类，进而达到减毒的效果。麻黄附子甘草汤是临床上较为经典的一种有效降低附子毒性的配伍，本文结果表明，与单一的提取液相比，附子与麻黄或甘草同时煎煮后毒性成分都有了明显的下降，并且三者同时煎煮时，乌头碱类毒性成分的含量是最低的，提示此种情况下附子的减毒效果最优。
综上所述，麻黄附子甘草同时煎煮时的减毒效果最优，该种配伍方式值得临床推广使用，然而，麻黄与附子的减毒机制及三者的配伍顺序对减毒效果的影响，还需进一步深入研究。
参考文献
[1]钟梅芳.麻黄附子甘草汤的不同配伍方式对其毒性成分的影响分析[J].实用中医内科杂志，2012，26（7）：68-69.
[2]陈荣昌，孙桂波，张强，等.附子毒性研究进展[J].中国中药杂志，2013（008）：1126-1129.
[3]汪剑飞.HPLC法测定不同厂家三七伤药片中乌头碱，新乌头碱和次乌头碱[J].中成药，2013，35（4）：717-720.
【关键词】麻黄；附子；甘草；减毒效果
麻黄附子甘草汤收载于《伤寒论》中，临床上主要用来治疗坐骨神经痛、恶寒发热等疾病，由麻黄、附子、甘草以一定的比例配伍组成，其中，麻黄发汗解表，附子助阳温经，甘草驱寒止痛[1]。《神农本草经》中记载，附子性大热、有大毒，其主要毒性成分为乌头碱、次乌头碱和新乌头碱等双酯类生物碱，主要对心脏、中枢神经系统有明显的毒害作用[2]。临床主要通过配伍和炮制来降低附子的毒性，本文以双酯类生物碱为研究对象，觀察麻黄附子甘草汤同时煎煮时的减毒效果，为药物的配伍及临床用药提供参考并奠定基础。
1仪器与试药
LC-2010A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；BS224S型电子天平（德国Sartorius公司）；麻黄、附子、甘草均由广东省药材公司中药饮品厂提供；乌头碱、新乌头碱和次乌头碱对照品购于中国药品生物制品检定所，乙醇、氯仿、甲醇、氨水为分析纯。
2方法与结果
2.1附子单煎液的提取取27g附子于锥形瓶中，加入220ml pH值为2.5酸性水，煎煮30min后，过滤并收集滤液，如此重复2次，合并滤液，氨水调pH值至9.0左右，再用同体积的氯仿萃取3次，以旋转蒸发仪除去分离的氯仿后，25ml无水乙醇复溶，混匀，备用。
2.2麻黄附子甘草汤的煎煮分别称取不同处方比例的麻黄、附子、甘草，用水煎煮。样品1：18g麻黄、27g附子，用水煎煮30min，即得；样品2：18g甘草、27g附子，用水煎煮，30min，即得；样品3：18g麻黄、18g甘草与27g附子，用水煎煮30min。
2.3样品中煎液的提取将“2.2”项下各样品过滤，收集滤液，用氨水将滤液pH值调至9.0，再用等体积的氯仿萃取3次，以旋转蒸发仪除去分离的氯仿，25ml乙醇复溶后，即得配伍溶液1-8。
2.4双酯类生物碱的测定
2.4.1色谱条件[3]色谱柱：Diamonsil C18（2）（5 μm，250×4.6 mm）；流动相：A0.1%三乙胺-B甲醇，梯度洗脱：0-20min，55%的A，20-55min，70%的A，55-60min，55的A；流速：1ml·min-1，检测波长：235nm；柱温30℃；进样体积：20μL。
2.4.2混合对照品溶液的配制称取乌头碱对照品10.2mg，次乌头碱对照品10.4mg以及新乌头碱对照品10.0mg置于10ml的容量瓶中，加适量甲醇溶解后，用甲醇继续定容至刻度，摇匀，于冰箱中保存，备用。
2.4.3标准曲线及线性范围分别吸取上述混合对照品容液0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0，置10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，在“2.4.1”项色谱条件下进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得乌头碱、次乌头碱及新乌头碱的回归方程分别为Y=2.23×106-4201.3（R=0.9999）、Y=2.38×106+5621.9（R=0.9997）、Y=2.63×106-4738.2（R=0.9999），结果表明乌头碱、次乌头碱及新乌头碱分别2.04-204μg/ml、2.08-208μg/ml、2.0-200μg/ml的范围内，浓度与峰面积线性关系良好。
2.4.4样品的测定取附子单煎液及3种配伍溶液适量，经0.45μm滤膜过滤后，取续滤液，按“2.4.1”项下色谱条件下进样，根据标准曲线计算乌头碱、次乌头碱及新乌头碱的浓度，见表1。
3讨论
附子为中药中的“回阳救逆第一品”，但其药效往往与毒性共存。附子中的主要毒性成分为二萜类的生物碱，其中双酯型乌头碱的毒性最大，活性最强，据报道，乌头碱经小鼠皮下注射的半数致死量为0.295mg/kg，乌头碱、次乌头碱及新乌头碱是引起心律失常的主要原因。目前临床上常通过炮制和配伍的方法来降低附子的毒性，如将附子与甘草、干姜、大黄、人参配伍，能有效降低乌头碱类的毒性成分含量，而炮制主要是通过煎煮时的水解作用，将双酯类乌头碱转变为毒性更小甚至是无毒的其他生物碱类，进而达到减毒的效果。麻黄附子甘草汤是临床上较为经典的一种有效降低附子毒性的配伍，本文结果表明，与单一的提取液相比，附子与麻黄或甘草同时煎煮后毒性成分都有了明显的下降，并且三者同时煎煮时，乌头碱类毒性成分的含量是最低的，提示此种情况下附子的减毒效果最优。
综上所述，麻黄附子甘草同时煎煮时的减毒效果最优，该种配伍方式值得临床推广使用，然而，麻黄与附子的减毒机制及三者的配伍顺序对减毒效果的影响，还需进一步深入研究。
参考文献
[1]钟梅芳.麻黄附子甘草汤的不同配伍方式对其毒性成分的影响分析[J].实用中医内科杂志，2012，26（7）：68-69.
[2]陈荣昌，孙桂波，张强，等.附子毒性研究进展[J].中国中药杂志，2013（008）：1126-1129.
[3]汪剑飞.HPLC法测定不同厂家三七伤药片中乌头碱，新乌头碱和次乌头碱[J].中成药，2013，35（4）：717-720.