【摘 要】
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目的确定细胞角蛋白13(cytokeratin 13, CK13)基因5′旁侧-nt.199～-nt.192碱基CTGAATCA反应元件的类型及其在CK13基因表达调控中的作用.方法采用报告基因分析的方法,构建CK13基因5′旁侧513 bp全片段、-nt.207～+nt.63与氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体,并采用PCR定点诱变技术,构建与-nt.207～+nt.63同样长短,但-n
【机 构】
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350005,福州,福建医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科,410008,长沙,中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科
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目的确定细胞角蛋白13(cytokeratin 13, CK13)基因5′旁侧-nt.199～-nt.192碱基CTGAATCA反应元件的类型及其在CK13基因表达调控中的作用.方法采用报告基因分析的方法,构建CK13基因5′旁侧513 bp全片段、-nt.207～+nt.63与氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体,并采用PCR定点诱变技术,构建与-nt.207～+nt.63同样长短,但-nt.198和-nt.197的T、G分别定点诱变为A、T的氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体,通过脂质体介导的转染技术导入HeLa细胞,检测各重组体报告基因的瞬间表达,确定CK13基因5′旁侧-nt.199～-nt.192碱基CTGAATCA在CK13基因表达调控中的作用;并采用凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验验证CK13基因5′旁侧中CTGAATCA反应元件的类型.结果凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验证实CK13基因5′旁侧-nt.199～-nt.192碱基CTGAATCA反应元件是AP1反应元件,它促进CK13基因的表达.结论 CK13基因5′旁侧起始密码子上游-nt.199～-nt.192的碱基CTGAATCA是AP1反应元件,而不是cAMP反应元件,它可增进CK13基因5′旁侧的转录活性.
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