丙酮酸激酶M2亚型在肾癌迁移侵袭中的作用及其机制

• 作 者: 王新君 白培明 赵晓昆 罗广承
• 机 构: 361004 厦门大学附属中山医院泌尿外科,361004 厦门大学附属中山医院泌尿外科,410011 长沙，中南大学湘雅二医院泌尿外科,361004 厦门大学附属中山医院泌尿外科
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2017年34期
• 关键词: 肾透明细胞癌 丙酮酸激酶M2亚型 迁移 侵袭 上皮-间充质转化

目的

探讨敲低丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)对肾癌细胞株ACHN迁移侵袭的影响及其机制。

方法

构建靶向PKM2基因的pLV载体，筛选稳定转染的细胞株。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测敲低PKM2对ACHN细胞增殖的影响。在Transwell小室的上室和下室之间不放置基质胶测定细胞的迁移能力，在Transwell小室的上室和下室之放置基质胶测定细胞的侵袭能力。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot的方法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的变化。

结果

CCK-8实验结果显示敲低PKM2抑制了ACHN的增殖。对照组的葡萄糖消耗率和乳酸生成率分别为(3.493±0.179)和(3.553±0.185) nmol/10⁶ cells/min，而shPKM2组的葡萄糖消耗率和乳酸生成率分别为(1.457±0.081)和(5.820±0.352) nmol/10⁶ cells/min(P＝0.001，P＝0.005)。Transwell迁移实验结果显示shPKM2组和对照组到达下室的细胞数分别为(62±6)个和(39±5)个(P＝0.001)。Transwell侵袭实验结果显示shPKM2组和对照组到达下室的细胞数分别为(40±7)个和(26±6)个(P＝0.009)。通过Western blot和RT-qPCR检测shPKM2组中E-cadherin蛋白和mRNA的相对表达量分别为1.560±0.110和2.534±0.342，而对照组中E-cadherin蛋白和mRNA的相对表达量分别为0.833±0.070和1.312±0.284(P＝0.001，P＝0.009)，shPKM2组中Vimentin蛋白和mRNA的相对表达量分别为0.340±0.110和1.631±0.123，而对照组中Vimentin蛋白和mRNA的相对表达量为0.653±0.100和3.530±0.511(P＝0.022，P＝0.003)。

结论

敲低PKM2表达显著抑制了肾癌细胞的有氧糖酵解、增殖、迁移和侵袭能力，并影响了上皮-间充质转化(EMT)过程。