【摘 要】
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目的建立检测1型肺炎球菌荚膜多糖（简称Pn1型多糖）中残留十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium bromide,CTAB）含量的反相高效液相色谱（reversed-phasehigh performance liquid chromatography,RP-HPLC）方法,并进行验证。方法色谱条件:选用反相色谱柱Waters/XSelect CSH C18（4.6 m
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目的建立检测1型肺炎球菌荚膜多糖（简称Pn1型多糖）中残留十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium bromide,CTAB）含量的反相高效液相色谱（reversed-phasehigh performance liquid chromatography,RP-HPLC）方法,并进行验证。方法色谱条件:选用反相色谱柱Waters/XSelect CSH C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为含三氟乙酸（trifluoroacetic acid,TFA）的10%甲醇水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为20℃,检测波长为206 nm。优化流动相甲醇中TFA的比例（0.01%、0.05%和0.1%）。Pn1型多糖用100μg/mL脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）水溶液溶解,超滤离心后上样。验证方法的专属性、线性范围、灵敏度、准确性及重复性。应用该方法检测3批Pn1型多糖样品CTAB残留量。结果选择含0.01%TFA的10%甲醇水溶液作为流动相;加标样品除有CTAB对照品色谱峰外,还有2个杂质峰,且3个峰均达到基线分离,表明方法专属性良好;CTAB对照品在0.2～4.0μg/m L浓度范围内与峰面积线性良好,r~2> 0.999;检出限及定量限分别为0.1和0.2μg/mL;0.2、0.4及0.6μg/mL浓度的加标样品回收率分别为101.18%、100.85%和101.72%,平行检测3次的RSD分别为1.69%、1.98%和0.76%。3批样品CTAB残留量均<0.324μg/mL,符合内控要求。结论成功建立了检测Pn1型多糖中残留CTAB含量的RP-HPLC法,该方法具有良好的专属性、线性、准确性,灵敏度高,重复性好,可用于肺炎球菌荚膜多糖中的残留CTAB检测。
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