过氧化物酶体增殖体激活受体γ2表达诱导NIH3T3细胞向脂肪细胞分化

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目的 通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(mPPARγ2)基因整合入NIH3T3细胞基因组中进行表达,并研究其功能。方法 从经测序证实含正确序列mPPARγ2的重组质粒pcDNA3/mPPARγ2中,双酶切下mPPARγ2全长cDNA序列,亚克隆入逆转录病毒载体pGCEN中构建重组逆转录病毒载体pGCEN/mPPARγ2。对pGCEN/mPPARγ2及pGCEN进行包装及G418抗性筛选,收集病毒上清,感染靶细胞NIH3T3细胞,进行G418抗性筛选并进行扩增。在含过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)激活物5,8,11,14-二十碳四烯酸等分化介质中,诱导PPARγ2表达增加,使NIH3T3细胞向脂肪细胞分化。结果 构建了含mPPARγ2全长cDNA重组逆转录病毒载体,获得了滴度分别为5×104CFU/ml和6×105CFU/ml的pGCEN/mPPARγ2及pGCEN的病毒上清。经油红O染色证实分化10d的表达mPPARγ2的NIH3T3细胞中明显积聚了较多的中性脂肪,其细胞形态也与体内成熟脂肪细胞相似。结论 本研究在体外建立了由PPARγ2诱导NIH3T3细胞向脂肪细胞分化模型,为进一步研究脂肪细胞分化的分子机制奠定了基础。

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