【摘 要】
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目的 探讨miR-218-5 p对结直肠癌(CRC)细胞侵袭、迁移能力的影响及分子机制.方法 利用生物信息学软件TargetScan、Pictar、miRanda及miRWalk预测miR-218-5p靶基因,采用双荧光素酶实验检测miR-218-5p与预测基因LASP1(LIM and SH3 protein 1)的靶向关系.体外培养CRC细胞株HCT116和SW116,各株细胞分为miR-218-5p组和control组,2组分别转染miR-218-5 p mimic和miRNA control.通过
【机 构】
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复旦大学附属肿瘤医院闵行分院肿瘤内科,上海 200240;同济大学附属同济医院病理科,上海 200065
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目的 探讨miR-218-5 p对结直肠癌(CRC)细胞侵袭、迁移能力的影响及分子机制.方法 利用生物信息学软件TargetScan、Pictar、miRanda及miRWalk预测miR-218-5p靶基因,采用双荧光素酶实验检测miR-218-5p与预测基因LASP1(LIM and SH3 protein 1)的靶向关系.体外培养CRC细胞株HCT116和SW116,各株细胞分为miR-218-5p组和control组,2组分别转染miR-218-5 p mimic和miRNA control.通过Transwell实验、划痕实验检测CRC细胞的侵袭及迁移能力.采用实时荧光定量聚合酶反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法检测HCT116各组细胞的LASP1 mRNA及蛋白表达,并增设阴性对照inhibitor组(转染miR-218-5p inhibitor).结果 miR-218-5p靶向调控LASP1的3′UTR,降低了荧光素酶的表达活性,F=46.041,P<0.001.Transwell实验中,miR-218-5p组细胞的侵袭能力较control组降低(HCT116:t=2.795,P<0.049;SW116:t=3.463,P<0.026).划痕实验表明,miR-218-5p组细胞的迁移能力同样低于control组(HCT116:t=2.883,P<0.045;SW116:t=-4.624,P<0.043).RT-qPCR及蛋白质印迹法结果显示,miR-218-5p组细胞的LASP1 mRNA(F=440.206,P<0.001)和蛋白表达水平(F=486.073,P<0.001)较control组和in-hibitor组下调.结论 miR-218-5 p通过靶向下调LASP1表达进而抑制CRC细胞的侵袭、迁移.
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