【摘 要】
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目的 探讨大豆异黄酮(ISO)调控Wnt-1基因表达影响骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的机制.方法 原代分离培养骨髓间充质干细胞,分别加入不同浓度(40、60、80μg/μL)的ISO处理(ISO-L组、ISO-M组、ISO-H组),用脂质体转染法将pcDNA、pcDNA-?Wnt-1分别转染至骨髓间充质干细胞(pcDNA组、pcDNA-Wnt-1组),将si-NC、si-Wnt-1分别转染至骨髓间充质干细胞后用ISO处理(ISO+si-NC组、ISO+si-Wnt-1组);甲基噻唑基四唑(MTT)检测细
【机 构】
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054000 邢台,河北省邢台市第五医院糖尿病消化科;054000 邢台,河北省邢台市医学高等专科学校第二附属医院超声科;054000 邢台,河北省邢台市医学高等专科学校第二附属医院消化内科;0540
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目的 探讨大豆异黄酮(ISO)调控Wnt-1基因表达影响骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的机制.方法 原代分离培养骨髓间充质干细胞,分别加入不同浓度(40、60、80μg/μL)的ISO处理(ISO-L组、ISO-M组、ISO-H组),用脂质体转染法将pcDNA、pcDNA-?Wnt-1分别转染至骨髓间充质干细胞(pcDNA组、pcDNA-Wnt-1组),将si-NC、si-Wnt-1分别转染至骨髓间充质干细胞后用ISO处理(ISO+si-NC组、ISO+si-Wnt-1组);甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测ISO对Wnt-1表达的影响;RT-qPCR与Western blot分别检测碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的表达量.两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 与对照组比较,ISO-L组、ISO-M组、ISO-H组细胞活力[24 h:(0.17±0.02)比(0.21±0.02)、(0.25±0.02)、(0.29±0.03);48 h:(0.26±0.03)比(0.39±0.03)、(0.48±0.04)、(0.53±0.05);72 h:(0.37±0.03)比(0.54±0.04)、(0.65±0.06)、(0.78±0.07)],骨髓间充质干细胞中ALP?mRNA?(1.00±0.06比1.74±0.16、2.53±0.21、3.06±0.29)及蛋白(0.41±0.04比0.62±0.06、0.74±0.05、0.83±0.07)、OPN?mRNA?(1.01±0.08比1.52±0.15、2.11±0.19、2.74±0.25)及蛋白(0.34±0.03比0.51±0.05、0.63±0.06、0.76±0.07)、Runx2?mRNA?(1.01±0.08比1.52±0.15、2.11±0.19、2.74±0.25)及蛋白(0.34±0.03比0.51±0.05、0.63±0.06、0.76±0.07)、Wnt-1?mRNA?(1.01±0.06比1.48±0.14、1.83±0.17、2.53±0.24)及蛋白(0.21±0.02比0.36±0.03、0.49±0.04、0.62±0.06)均呈逐渐升高趋势,差异有统计学意义(P均<0.05).与pcDNA组比较,pcDNA-Wnt-1组细胞活力[24 h:(0.18±0.02)比(0.24±0.02);48 h:(0.25±0.03)比(0.51±0.05);72 h:(0.36±0.03)比(0.72±0.06)]、ALP?mRNA[(1.01±0.08)比(2.89±0.27)]及蛋白[(0.40±0.04)比(0.79±0.07)]、OPN?mRNA[(0.99±0.07)比(2.53±0.25)]及蛋白[(0.33±0.03)比(0.71±0.06)]、Runx2?mRNA[(1.00±0.06)比(2.14±0.21)]及蛋白[(0.21±0.02)比(0.62±0.06)]的表达量均呈逐渐升高趋势,差异有统计学意义(P均<0.05).与ISO+si-NC组比较,ISO+si-Wnt-1组细胞活力[24 h:(0.25±0.03)比(0.19±0.02);48 h:(0.56±0.05)比(0.31±0.03);72 h:(0.82±0.08)比(0.49±0.04)]、ALP?mRNA[(3.14±0.31)比(1.67±0.16)]及蛋白[(0.87±0.08)比(0.51±0.05)]、OPN?mRNA[(2.79±0.26)比(1.43±0.13)]及蛋白[(0.79±0.08)比(0.43±0.04)]、Runx2?mRNA[(2.36±0.24)比(1.35±0.13)]及蛋白[(0.68±0.07)比(0.34±0.03)]的表达量均呈逐渐降低趋势,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 ISO通过调控Wnt-1基因表达而增强骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化功能.
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