大鼠凝血因子Ⅶ EGFP-EGF1融合蛋白的表达及其结合功能初步研究

• 作 者: 梅恒 胡豫 张迎红 王华芳 方峻 郭涛 魏文宁
• 机 构: 华中科技大学附属协和医院血液病研究所,湖北省生物靶向重点实验室
• 出 处: 中国实验血液学杂志
• 发表日期: 2008年1期
• 关键词: 凝血因子Ⅶ 组织因子 主动脉内皮细胞 重组融合蛋白 coagulation factor Ⅶ tissue factor hemangioendothel

本研究通过融合蛋白EGFP-EGF1的表达,探讨大鼠凝血因子Ⅶ上EGF1片段与组织因子（TF）的结合功能。用RT-PCR方法自大鼠肝脏组织获得EGF1编码区基因并将其插入EGFP原核表达载体中,构建pET28a-EGFP-EGF1融合蛋白表达载体;将该重组质粒转化大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达EGFP-EGF1融合蛋白;采用亲和层析方法Ni柱纯化融合蛋白,将融合蛋白作用于经脂多糖刺激表达TF的大鼠血管内皮细胞;通过荧光显微镜及流式细胞术观察和检测融合蛋白与细胞结合情况。结果表明：EGFP-EGF1