【摘 要】
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目的 制备抗重组人白细胞介素-12(rhIL-12)单克隆抗体(McAb),并建立检测IL-12的双抗体夹心ELISA方法.方法 以纯化的rhIL-12(p70)免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,建立双抗体夹
【机 构】
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吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学中心
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目的 制备抗重组人白细胞介素-12(rhIL-12)单克隆抗体(McAb),并建立检测IL-12的双抗体夹心ELISA方法.方法 以纯化的rhIL-12(p70)免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测胃癌患者术前、术后血清IL-12水平的变化.结果 筛选出3株稳定分泌抗rhIL-12的单抗杂交瘤细胞株,纯化后单抗纯度达95%以上.免疫球蛋白亚类2株为IgG1,1株为IgG2a.轻链属κ型,相对亲和力依次为EM5＞EM6＞EV9.Western blot及ELISA交叉试验表明,单抗具有良好的特异性.建立的双抗体夹心ELISA方法检测rhlL-12的最低检出限为20 pg/ml,线性范围为25～3 200 Pg/ml.应用此法检测胃癌患者术前血清IL-12水平较正常对照组明显降低,术后10 d明显升高.术后给予免疫增强型NE组IL-12水平较未给予组明显升高.结论 制备的抗rhIL-12单克隆抗体,能够用于IL-12的体内外免疫学检测,为IL-12的研究、检测及临床应用奠定了基础.
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