【摘 要】
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目的 纯化制备含有编码T细胞受体(TCR)Vβ5.2和TCR Vβ8.2基因片段的DNA疫苗,研究其对胶原诱导性关节炎(CIA)的保护性作用.方法 大量纯化制备重组DNA疫苗pTargeT-TCRVβ5.2、
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目的 纯化制备含有编码T细胞受体(TCR)Vβ5.2和TCR Vβ8.2基因片段的DNA疫苗,研究其对胶原诱导性关节炎(CIA)的保护性作用.方法 大量纯化制备重组DNA疫苗pTargeT-TCRVβ5.2、pTargeT-TCR Vβ8.2和空质粒pTargeT,观察重组DNA疫苗对CIA的保护效果,包括关节炎指数评分、大鼠后肢足关节的病理学分析、用Eli-spot法观察脾细胞分泌的干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4水平的改变、用流式细胞术分析外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群及其比值的变化、用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中抗Ⅱ型胶原(CⅡ)抗体水平的改变等.用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学染色法检测目的基因的转录和表达.结果 重组TCR DNA疫苗pTargeT-TCR Vβ5.2和pTargeT-TCRVβ8.2对CIA大鼠有较好的保护性作用,关节炎指数明显下降(P＜0.05),炎性细胞因子IFN-γ水平(P＜0.05)、CD4+/CD8+比值(P＜0.05)和抗CⅡ抗体水平(P＜0.01)降低,而抑制性细胞因子IL-4水平升高(P＜0.05),病理改变亦较CIA对照组轻.且两种重组质粒联合治疗较单种重组质粒的效果更好.并且在注射部位的肌肉组织内检测到重组蛋白的转录和表达.结论 重组表达载体pTargeT-TCR Vβ5.2和pTargeT-TCRVβ8.2能明显减轻CIA大鼠的关节炎症状和体征,且二者联合应用效果更佳.
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