【摘 要】
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目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-30c-2-3p在心肌细胞缺氧预处理心肌保护中的作用. 方法 新生SPF级大鼠心肌细胞培养72 h后,接种于6孔板中,密度为5×105个/ml,按随机数字表
【机 构】
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中国医学科学院,北京协和医学院,整形外科医院麻醉科 100144首都医科大学附属北京友谊医院麻醉科 100050;
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目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-30c-2-3p在心肌细胞缺氧预处理心肌保护中的作用. 方法 新生SPF级大鼠心肌细胞培养72 h后,接种于6孔板中,密度为5×105个/ml,按随机数字表法分为3组(每组72个培养孔,检测各指标时每组取6孔,重复3次):对照组(Sham组)、缺氧/复氧组(AR组)和缺氧预处理组(PAR组).Sham组心肌细胞正常培养,AR组心肌细胞进行缺氧3h/复氧6h处理,PAR组心肌细胞在进行缺氧3h/复氧6h处理前行缺氧30 min/复氧30 min单循环处理.复氧6h后,各组采用比色法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR (real-time PCR)法检测miRNA-30c-2-3p和X-box结合蛋白-1(X-box binding protein-1,XBP1)mRNA表达水平,Western blot法检测XBP1s(内质网应激后,XBP1剪接后翻译成具有转录调节活性的XBP1)和免疫球蛋白结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BiP)表达情况.采用双荧光素酶基因报告实验验证miRNA-30c-2-3p和XBP1的靶向关系. 结果 与Sham组比较,AR组和PAR组心肌细胞LDH漏出率和细胞凋亡率升高,miRNA-30c-2-3p、XBP1 mRNA和XBP1s、BiP表达升高(P＜0.05).与AR组比较,PAR组心肌细胞LDH漏出率和细胞凋亡率降低,miRNA-30c-2-3p表达降低,XBP1 mRNA和XBPIs、BIP表达升高(P＜0.05).双荧光素酶基因报告结果证实XBP1为miRNA-30c-2-3p的靶基因. 结论 缺氧预处理可能是通过低表达miRNA-30c-2-3p进而增加XBP1s表达而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,BiP可能是XBP1产生心肌保护效应的下游因子之一.
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