【摘 要】
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用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌，以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体，用ＰｓｔⅠ和ＥｃｏＲⅠ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切，并将酶切片段用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，用电激法将重组ＤＮＡ转入
【机 构】
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浙江师范大学生物系,中山大学生物防治国家重点实验室
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用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌，以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体，用ＰｓｔⅠ和ＥｃｏＲⅠ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切，并将酶切片段用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，用电激法将重组ＤＮＡ转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ．ＢＥ２０中，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察证明：δ－内毒素基因在Ｂｔｋ．ＢＥ２０中得到表达，并具有较高的表达量．生物测定表明，重组株对夜蛾科幼虫具有较高的毒性．此外，对质粒提取的方法也进行了讨论．
The new isolate S11-11 with strong toxic effect on the noctuid larvae of Lepidoptera was the donor of δ-endotoxin gene. The shuttle plasmid PHT3101 was used as the vector and the PstⅠand EcoRI The vector DNA was double digested, and the digested fragments were ligated with T4 DNA ligase, and the recombinant DNA was transferred into Btk without Bacillus thuringiensis strain by electroporation. BE20, SDS-PAGE protein electrophoresis and scanning electron microscopy showed that: δ-endotoxin gene in Btk. BE20 expression, and has a higher expression level. Bioassays showed that the recombinant strains were highly toxic to the noctuaid larvae. In addition, plasmid extraction methods are also discussed.
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